Роль митохондрий в развитии окислительного стресса при экспериментальном рабдомиолизе

• Автор: Чупыркина, Анастасия Андреевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил.

Оглавление
1. Введение
2. Обзор литературы
1. Причины рабдомиолиза
2. Клинические проявления рабдомиолиза
3. Причины, приводящие к развитию острой почечной недостаточности при рабдомиолизе
3.1. Роль ионов железа в развитии окислительного стресса при рабдомиолизе
3.2. Участие гемовой группы миоглобина в развитии окислительного стресса в почке при рабдомиолизе
3.3. Развитие гипоксии в почке при рабдомиолизе
3.4. Развитие ацидоза при рабдомиолизе
3.5. Участие опиоидных пептидов в патогенезе почки при рабдомиолизе
4. Дисфункция почки при рабдомиолизе связана с развитием в ней окислительного стресса
4.1. Роль N0 и активных форм азота
4.2. Клубочковые изменения
4.3. Канальцевые повреждения
4.4. Изменения эндотелия при окислительном стрессе
4.5. Участие клеточных факторов ОТ-кВ и ТвР — Р в патогенезе почки
5. Участие антиоксидантов в предотвращении почечных болезней
5.1. Митохондрпально-адрессованные антиоксиданты
6. Участие митохондрий в развитии внутриклеточного окислительного стресса при миоглобинурии
7. Возможное развитие нитрозильного стресса при рабдомиолизе
8. Центральная роль митохондрий в регуляции апоптоза
3. Методы
1. Индукция рабдомиолиза
2. Определение концентрации белка

"> *>

3. Определение малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови, гомогенате
почек и в митохондриях крыс
4. Определение нитрита в сыворотке крови и супернатанте митохондрий
5. Определение общей антиоксидантной активности (ОАА) сыворотки крови
6. Выделение митохондрий из почек крыс
7. Полярографический метод регистрации скорости дыхания митохондрий
8. Инкубация митохондрий с миоглобином (БСА, гемоглобином,
протеолизированным миоглобином) in vitro
9. Определение миоглобина и цитохрома с в сыворотке крови, гомогенатах и
митохондриях методом иммуноблоттинга
10. Протеолиз миоглобина пепсином in vitro
11. Получение культуры клеток почки
12. Инкубация канальцев и культуры клеток почки с миоглобином
протеолизированным миоглобином
13. Оценка продукции АФК
14. Иммуноцитохимия
15. Гистология
16. Лечение крыс митохондриально-адресованными соединениями
17. Определение содержания тема в цитозоле и митохондриях почек крыс после индукции рабдомиолиз
18. Определение ионов свободного железа
Статистика
4. Результаты
1. Развитие острой почечной недостаточности при экспериментальном
рабдомиолизе
2. Развитие окислительного стресса при моделировании рабдомиолиза
3. Повреждение митохондрий клеток почки при рабдомиолизе
4. Влияние миоглобина на функционирование митохондрий in vitro
5. Миоглобин приводит к увеличению продукции оксида азота
6. Влияние митохондриалыго - адресованных соединений на развитие почечной
недостаточности

7. Влияние протеолитической деградации миоглобина на его нефротоксичностъ
и взаимодействие с митохондриями
8. Появление продуктов деградации миоглобина в ткани почки при
рабдомиолизе
5. Выводы
6. Благодарности
7. Список литературы
Антиоксиданты обладают цитопротекторным действием благодаря их способности улавливать свободные радикалы, нейтрализуя их. Также они играют ключевую роль в устранении воспалительного процесса в клубочках благодаря снижению активности воспалительных ферментов и секреции цитокинов, или ингибируя NF-кВ (Massy, Nguyen Khoa et al. 1999). Был показан защитный эффект полифенола кверцитина, витамина С, также супрессирующих NF-кВ (Ishikawa and Kitamura 2000, Wu, Wang et al. 2001, Bowie and O'Neill 2000). Более того, было показано, что длительное употребление богатого полифенолами красного вина снижает уровень липопротеинов низной плотности в крови, также способствуя защите клубочков (Cascon, Roig et al. 2001). Природный фитоалексин ресвератрол, найденный в вине и винограде, и синтезирующийся в большом количестве растений в ответ на стресс или грибковую инфекцию, «ловит» электроны благодаря своей системе сопряженных связей (Plin, Tillement et al. 2005). Он эффективно улучшает дыхательные характеристики митохондрий, предотвращает выход цитохрома с, открытие митохондриальной поры и активацию каспаз в почках крыс при ишемии-реперфузии (Plin, Tillement et al. 2005). В итоге снижается протеинурия, гипоальбуминемия, гиперлипедемия (Nihei, Miura et al. 2001). Длительное применение ресвератрола значительно снижает уровень креатинина в плазме и предотвращает клубочковый коллапс при ишемии - реперфузии в почках крыс (Giovannini, Migliori et al. 2001).
Эти функциональные эффекты антиоксидантов были подтверждены гистологически. Также было продемонстрировано, что лечение биофлавоноидами, в частности proanthocyanidin-BPl, значительно облегчает протекание острой почечной недостаточности в глицерин-индуцированной модели рабдомиолиза (Avramovic, Vlahovic et al. 1999). Кроме того, биофлавоноиды, содержащиеся в вине, способствуют снижению уровня креатинфосфокиназы в сыворотке крови, и повышению экспрессии почками антиоксидатных ферментов - каталазы, глутатион-пероксидазы и супероксиддисмутазы (Rodrigo, Bosco et al. 2004). Вероятно, защитный эффект биофлавоноидов обусловлен не только их антиоксидантными свойствами, но и увеличением экспрессии почечной дипептидазы IV, которая участвует в деградации фактора TNF-a. (Singh, Kaur et al. 2006). Биофлавоноид иарингин, найденный в грейпфрутах и многих цитрусовых, является хелатором, антиоксидантом и ловушкой свободных радикалов, а также препятствует мутагенезу. Он эффективно восстанавливает почечные функции в глицерин-индуцированной модели рабдомиолиза: лечение крыс нарингином приводило к значительному