Исследование факторов, определяющих избирательное влияние производного 6-метилурацила на активность ацетилхолинэстеразы в органах и тканях Rattus norvegicus

• Автор: Ланник, Наталья Ивановна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ацетилхолинэстераза, ее функции и строение
2. Бутирилхолинэстераза и ее функции
3. Ингибиторы ацетилхолинэстеразы
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Определение первичной нуклеотидной последовательности и интронно-экзонной структуры гена ache Rattus non’egicus
2. Различие в уровне экспрессии мРНК изоформ гена ache органов и тканей Rattus norvegicus
3. Влияние гликозилирования ацетилхолинэстеразы на обеспечение чувствительности к производным 6-метилурацила
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АХЭ - ацетилхолинэстераза АХ - ацетилхолин
АТХ - ацетилтиохолин йодистый (CH3COSCH2CH2N(CH3)CI) анти-ХЭ - антихолнэстеразные препараты ацетил-КоА - ацетил коэнзим А БХЭ - бутирилхолинэстераза
гяРНП - гетерогенные ядерные рибонуклеопротеиды
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
мяРНП - малые ядерные рибонуклеопротеиды
МТКП - миниатюрные токи концевой пластинки
М-ХР - мускариновые холинорецепторы
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция - полимеразная цепная реакция ПАС - периферический анионный сайт
пре-мРНК - предшественник матричной рибонуклеиновой кислоты ПКП - потенциал концевой пластинки п.н. - пар нуклеотидов
Полимераза Taq - термостабильный фермент Thermus aquaticus ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени
РНК - рибонуклеиновая кислота
т.п.н. - тысяч пар нуклеотидов
ХАТ - холинацетилтрансфераза
ППС - центральная нервная система
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭПР - эндоплазматический ретикулум
ache - ген, кодирующий ацетилхолинэстеразу

AML1 - Acute Myeloid Leukemia - транскрипционный фактор острого миелоидного лейкоза
bche - ген, кодирующий бутирилхолинэстеразу
BDNF - Brain Derived Neurotrophic Factor - нейротрофический фактор мозга
BSA - Bovine Serum Albumin - бычий сывороточный альбумин
CREB - с AMP Response Element-Binding protein - белок связывающий цАМФ
CGRP - Calcitonin Gene-Related Peptide - кальцитонин ген-связанный пептид
ColQ - CollagenQ - коллаген Q
dNTP - дезоксинуклеозидтрифосфат
DMEM - Dulbecco’s modified Eagle’s medium - среда Игла,
модифицированная Дульбекко
DTNB - 5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid) - 5,5’дитиобис-2-нитробензойная кислота
EDL - Extensor Digitorum Longus - длинный разгибатель пальцев
EGF - Epidermal Growth Factor - эпидермальный ростовой фактор
EGFP - Enhanced Green Fluorescent Protein - улучшенный зеленый
флуоресцентный белок
FBS - Fetal Bovine Serum - эмбриональная бычья сыворотка
GDNF - Glial Cell Derived Neurotrophic Factor - глиальный
нейротрофический фактор
GPI - Glicophosphotidil inositol - гликофосфотидил инозитол
HEK293T - Human embryonic cidney cells - эмбриональные клетки почки
человека
HSPG - Heparan Sulfate Proteoglycan - гепаран сульфат протеогликан
IL-1 - interleukine - интерлейкин
NGF - Nerve Growth Factor - фактор роста нервов
NT-3 - Neurotrophin-3 - нейротрофин
NT-4 - Neurotrophin-4 - нейротрофин
PPII - Polyprolinell - полипролинП

снижением ферментативной активности на 33% (Liua et al., 2002; Darvesh et al., 2003; Parmo-Folloni et al., 2008; Pamas et al., 2011). Следует отметить, что в связи с локализацией данной мутации на С-конце, необходимом для образования тетрамеров и определяющим способность БХЭ образовывать |3-амилоидные фибриллы, присутствие данного варианта в организме увеличивает риск развития болезни Альцгеймера на 20% (Podoly et al., 2009; Pamas et al., 2011). «.(»-вариант образуется в результате мутации в позиции 497 с заменой Glu на Val и снижением ферментативной активности на 66% в отличие от БХЭ дикого типа. В «Н»-варианте происходит замена Val на Met в позиции 142 и снижение активности на 90%. При этом существует около 12 мутантных форм БХЭ с полным отсутствием ферментативной активности. Такие формы фермента принято называть «молчащими», так как они не могут гидролизовать эфиры холина (Parmo-Folloni et al., 2008;Pan et al., 2009; Boberg et al., 2010; Parnas et al., 2011).
БХЭ гидролизует сложные эфиры холина, такие как бутирилхолин, сукцинилхолин и ацетилхолин. Структурно и функционально, БХЭ подобна АХЭ. Также как и АХЭ, БХЭ принадлежит к семейству а/(3-гидролаз и в ее аминокислотной последовательности присутствуют остатки серина, необходимые для его каталитической активности. Каждая каталитическая субъединица БХЭ II. sapiens состоит из 574 аминокислотных остатков (£okugra§, 2003; Pezzementi et al., 2011). Активный центр БХЭ образует каталитическая триада, состоящая из Ser226, His466 и Glu353, расположенных в глубоком ущелье, в котором, в отличие от АХЭ, содержится не 14, а всего 6 аминокислот, содержащих ароматические кольца (Рис. 4).