Активированная хемилюминесценция как метод изучения свободнорадикальных реакций в клетках и тканях

• Автор: Матвеева, Наталья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 204 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность исследования
1.2. Цель и задачи исследования
1.3. Научная новизна
1.4. Практическая значимость
1.5. Положения, выносимые на защиту
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Первичные и вторичные свободные радикалы
2.2. Активные формы кислорода и азота и оксидативный стресс
2.2.1. Активные формы кислорода
2.2.2. Монооксид азота и активные формы азота
2.3. Собственная хемилюминесценция клеток и тканей
2.3.1. Реакции перекисного окисления липидов
2.3.2. Кинетика железо-индуцированной хемилюминесценции
2.3.3. Реакции с участием активных форм кислорода
2.3.4. Реакции с участием пероксинитрита
2.4. Активированная хемилюминесценция клеток и тканей
2.4.1. Люминол-активированная ХЛ
2.4.2. Люцигенин-активированная ХЛ
2.4.3. Родамин-активированная ХЛ
2.4.4. Кумарин-активируемая ХЛ
2.5. Роль АФК, изучаемых методами хемилюминесценции, при различных патологических состояниях
2.5.1. Роль АФК при разных патологических состояниях
2.5.2. Ишемическое повреждение миокарда и мозга и роль оксидативного стресса
2.5.3. Оксидативннй стресс у больных ишемической болезнью сердца во время операции прямой реваскуляризации миокарда в условиях искусственного кровообращения
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Объекты исследования
3.1.1. Клиническая характеристика больных
3.1.2. Получение крови и плазмы крови
3.1.3. Срезы, кашицы и гомогенаты тканей органов крысы
3.1.4. Выделение митохондрий
3.1.5. Приготовление эмульсии жирной кислоты и ее гидропероксида
3.1.6. Приготовление многослойных фосфолипидных липосом
3.2. Материалы
3.3. Оборудование
3.4. Методы
3.4.1. Клинические лабораторные методы исследования
3.4.2. Метод люминол-активированной хемилюминесценции
3.4.3. Метод люцигенин-активированной хемилюминесценции
3.4.4. Метод родамин Ж-активированной хемилюминесценции
3.4.5. Метод кумарин-активированной хемилюминесценции
3.4.6. Флуоресцентный метод
3.4.7. Спектрофотометрический метод
3.5. Статистическая обработка результатов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Изучение люминол-зависимой ХЛ фагоцитов цельной крови у больных в периоперационном периоде
4.1.1. Подбор условий измерения люминол-зависимой ХЛ
4.1.2. Изменение показателей клинического анализа крови и коагулограммы у больных в периоперационном периоде
4.1.3. Изменение функционального состояния фагоцитирующих клеток больных в периоперационном периоде
4.2. Исследование изменения антиоксидантной емкости плазмы крови у больных в периоперационном периоде
4.2.1. Подбор условий для измерения АОЕ плазмы крови
4.2.2. Изменение АОЕ плазмы крови у больных в периоперационном периоде
4.3. Изучение железоиндуцированной ХЛ плазмы крови, активированной родамином Ж, у больных в периоперационном периоде
4.3.1. Подбор условий
4.3.2. Изменение активированной родамином Ж ХЛ плазмы крови у
больных в периоперационном периоде
4.4. Применение активированной кумарином С-525 ХЛ для изучения реакций с участием пероксильных радикалов в модельных и биологических системах
4.4.1. Изучение образования пероксильных радикалов в плазме крови методом железоиндуцированной КХЛ
4.4.2. Изучение образования пероксильных радикалов методом КХЛ при разложении трет-бутилгидропероксида
4.4.3. Изучение образования пероксильных радикалов методом КХЛ при разложении гидропероксида линолевой кислоты
4.4.4. Изучение влияния взаимодействия бычьего сывороточного альбумина с кумарином С-525 на кумарин-активированную ХЛ
4.5. Применение активированной ХЛ для изучения образования радикалов в кусочках ткани
4.5.1. Люминол-активированная ХЛ
4.5.2. Кумарин-активированная ХЛ
4.5.3. Люцигенин-активированная ХЛ
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

На заключительном этапе в эндопероксидной группе разрывается связь между атомами кислорода и образуется молекула монопротонированной аминофталевой кислоты в электронно-возбужденном состоянии с последующим испусканием кванта света (реакции 7 и 8 на рис. 2).
Путь превращения гидропероксидного ключевого продукта до электронно-возбужденной аминофталевой кислоты (реакции 4-8 на рис. 2) — один и тот же при действии многих оксидантов [74,237]. Но само образование гидропероксида может идти разными способами (см. ниже).
Хемилюминесценция люминола в присутствии гипохлорита
Гипохлорит окисляет люминол (ІДО, возможно через стадию его хлорпроизводного (ШС1) [74], до аминобензодиазахинона (ДВОС) (рис. 3):
ЬН2 + НОСІ -> Н20 + ЬНСІ -» НС1 + Ь (АЕЮС).
мн2 о ын2 о зш2 о
Люминол (1_Н2) ИНС1 АВйС (Ц

н2о2
I I 'ООН
гш2 он
ШООН юон~
Г идропероксид люминола
Рис. 3. Окисление люминола гипохлоритом
В присутствии Н202 может образоваться гидропероксид люминола -— ключевое звено ХЛ-реакции [74]:
ь+н2о2->шоон.