Ген ключевого белка деления FtsZ микоплазмы Acholeplasma laidlawii : Клонирование, экспрессия в клетках E. coli и эволюционный консерватизм

• Автор: Кукекова, Анна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 103 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПЦР - полимеразная цепная реакция
IPTG - изопропилтио-р-Э-галактозид
SSC - стандартный цитратно-солевой буффер
SDS - додецилсульфат натрия
PAAG - полиакриламидный гель
GST - глютатион S-трансфераза
DHFR - дегидрофалатредуктаза
BSA - бычий сывороточный альбумин
orf - участок ДНК с открытой рамкой считывания
ORF - продукт, кодируемый ДНК с открытой рамкой считывания
SOS-ответ - система реперации E.coli
ОГЛАВЛЕНИЕ
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ОБЗОР ЛИТЕ РАТУРЫ
1. Размножение клеток
бактерий
2. Формирование сайта инициации сборки кольца деления
3. Белок FtsZ
4. Ингибирование деления клеток бактерий
5. Цитоскелет-подобные о.;:смон'гь1 л деление клеток микоплазм
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Штаммы и условия культивирования
2. Плазмиды. Трансформация
3. Амплификация и клонирование
4. Гибридизация
5. Скрининг бактериальных библиотек
6 . Сиквенс
7. Компьютерный анализ
8. Получение и очистка химерного полипептида
9. Получение и очистка антител
10 . Иммуноблотинг
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Клонирование гена ftsZ A.laldlawii
2. Получение поликлональных антител и характеристика белков FtsZ A.laidlawii и S.citri
3. Экспрессия белка FtsZ A.laidlawii в клетках

V. ОБСУЖДЕНИЕ

1. Клонирование и анализ гена и белка Кбэг микоплазмы А. 1а1с11а!лЫ1
2. Сравнение последовательностей белка Кбэг может использоваться для филогенетического анализа прокариот
VI. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

однонитевой ДНК, образовавшейся при действии на клетку повреждающих агентов, и переходит в активную форму RecA* (Sassanfar, Roberts, 1990). Активированный RecA* способен расщеплять ряд белков: А,-репрессор, UmuD, и, что наиболее важно, LexA, являющийся транскрипционным репрессором. Разрезание LexA дерепрессирует более чем 20 генов LexA регулона. Экспрессия генов, прямо контролируемых LexA, приводит к повышению уровня белков рекомбинации (RecA, RecN, RuvA, RuvB), ДНК репарации (UvrA, Ssb, UvrB, UvrD), SOS индуцирующих мутагенов (UmuCD) и ингибитора клеточного деления SulA(SfiA) (Hill et al., 1997).
Биохимические и генетические исследования показали, что SulA прямо взаимодействует с FtsZ. ГТФ необходим для образования комплекса двух белков, однако, ГТФазная активность FtsZ в этом процессе не зарегистрирована. Связывание с SulA возможно блокирует участок FtsZ, необходимый для локализации в сайте деления, либо делает FtsZ-FtsZ взаимодействие непродуктивным для полимеризации (Huang et al., 1996). В результате процесс бактериального деления останавливается, и клетки Е.coli образуют длинные несептированные филаменты. Возобновление клеточного деления происходит после восстановления повреждений и запуска репликации ДНК.
Супрессия активации RecA и, соответственно, инактивации LexA вновь приводит к торможению транскрипции генов SOS ответа. Инактивация SulA происходит в результате действия АТФ-зависимой протеазы Lon. В клетках, мутантных по гену Ion, индукция SOS ответа приводит к формированию