Активация и транспорт в ядро МАР-киназы под действием эпидермального фактора роста (ЭФР) в клетках с различными мутациями рецептора ЭФР

• Автор: Арнаутов, Алексей Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 99 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Эпидермальный фактор роста (ЭФР) и его рецептор
2.2. Связывание с лигандами и активация ЕгЬВ
2.3. Передача сигнала с ЭФР-Р
2.4. МАР-киназный каскад
2.4.1. Активация МАР-киназного каскада рецептором ЭФР
2.4.2. Регуляция МАРК каскада
2.4.3. Мишени МАР-киназы
2.4.4. Субклеточное распределение участников ERK каскада
2.5. Участие цитоскелета в проведении сигнала
2.6. Взаимодействие сигнальных путей
2.7. Транспорт в ядро сигнальных молекул
2.7.1. Классический путь
2.7.2. Альтернативные пути транспорта
2.7.3. Регуляция транспорта в ядро
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Культивирование клеток
3.2. Обработка клеток нокодазолом, цитохалазином Д,
колхицином, таксолом и циклогексимидом
3.3. Антитела
3.4. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
3.5. Конъюгация пероксидазы с антителами
3.6. Получение антител
3.7. Иммунопреципитация
3.8. Субклеточное фракционирование
3.9. Аффинная хроматография
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. МАР-киназа активируется различными агонистами
4.2. Исследование роли тирозинкиназы и С-терминального домена рецептора в активации и ядерном транспорте МАР-киназы
4.3. Влияние нокодазола и цитохалазина на активацию и транспорт МАР-киназы в ядро
4.4. МАР-киназа ассоциирована с эндоплазматическим ретикулумом
4.5. Транспорт МАР-киназы в ядро не
опосредуется кариоферином а
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. ВВЕДЕНИЕ
Действие эпидермального фактора роста (ЭФР) на клетки реализуется через специфический рецептор - крупный трансмембранный белок, обладающий тирозинкиназной (ТК) активностью и несколькими сайтами автофосфорилирования, находящимися на С-конце рецептора. Связывание ЭФР с рецептором приводит к стимуляции ТК и инициирует два ряда событий: активацию сигнальных путей и интернализацию ЭФР-рецепторных комплексов. Среди сигнальных путей, стимулируемых ЭФР, особое место занимает МАР-киназный каскад, которому в последнее время отводится едва ли не самая главная роль в опосредовании клеточного ответа на внешний стимул. Этот каскад включает ряд серин-треониновых протеинкиназ и состоит из двух способов активации МАР-киназы (МАРК) разных субкпассов. В настоящее время выделяют три субкласса MAP-киназ: ERK, JNK(SAPK) и р38МАРК (Marshall, 1994). Активация так называемого ERK-пути происходит посредством активации малой ГТФазы Ras. Сигнал с активированного Ras передается на каскад серин-треониновых протеинкиназ, первой из которых явялется c-Raf киназа. Сигнал с c-Raf передается на киназу МАРК (МАРКК или МЕК), которая в свою очередь активирует фосфорилированием МАР-киназу. Активная форма МАР-киназы транслоцируется затем в ядро, где фосфорилирует белки Elk-1 и Elf-1, входящие в тернарный комплекс транскрипционных факторов, а также транскрипционный фактор Sapla. В настоящее время описано семь различных изоформ ERK, две из которых являются основными - р42 и р44 MAP-киназа (или ERK1, 2). Другие два субкласса МАРК активируются клеточным стрессом по

Как уже было отмечено, в настоящее время существует мало данных о роли как актинового, так и тубулинового цитоскелета в регуляции активации и транспорта в ядро
ER К

ядро
Схема 6. ЭФР активирует МАР-киназу с помощью различных механизмов, способ транслокации МАРК в ядро - неизвестен.
различных сигнальных молекул. Недавно было убедительно продемонстрировано, что ядерный транспорт протеинкиназы Са, не имеющей последовательности ядерной локализации, требует наличия интактного цитоскелета (Schmalz et al., 1996).
Также показана роль микротрубочек в транспорте капсидов вируса герпеса от плазматической мембраны в ядро