Биолюминесцентная АТФ-метрия в клинической и санитарной микробиологии

• Автор: Фунджян, Валерий Гайкович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с.

ПРИНЯТЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1. МЕТОДОЛОГИЯ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АТФ В «БЫСТРОЙ МИКРОБИОЛОГИИ»
1.1. МЕТОДЫ «БЫСТРОЙ МИКРОБИОЛОГИИ»
1.2. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ АТФ КАК ИНДИКАТОР ПРИСУТСТВИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ КЛЕТОК (ЖИВОТНЫХ, РАСТИТЕЛЬНЫХ, МИКРОБНЫХ) В РАЗЛИЧНЫХ ОБРАЗЦАХ
1.3. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АТФ
1.4. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АТФ
1.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АТФ В РАЗЛИЧНЫХ ОБРАЗЦАХ
1.5.1. Определение суммарного содержания (пула) АТФ
1.5.2. Определение соматического АТФ
1.5.3. Определение микробного (бактериального) АТФ
1.6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ОБРАЗЦОВ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ
2. НЕКОТОРЫЕ ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО МЕТОДА АТФ-МЕТРИИ
2.1. БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД АТФ-МЕТРИИ В МЕДИЦИНЕ
2.1.1. Регистрация различных метаболических изменений на клеточном уровне
2.1.2. Диагностика бактериемии и бактериурии
2.1.3. Мониторинг концентрации антибиотиков в клинических образцах, определение величины минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков, постантибиотических эффектов
2.1.4. Оценка антибиотикочувствительности микрофлоры в клинических образцах

2.2. БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД АТФ-МЕТРИИ В
ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
2.2.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ 42 ОБСЕМЕНЕННОСТИ МОЛОКА
2.2.1.1. Сырое молоко
2.2.1.2. Пастеризованное и сухое молоко
2.2.1.3. Факторы, влияющие на точность и воспроизводимость 54 определения ОБО молока биолюминесцентным методом
2.2.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБНОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ МЯСА
2.2.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСТОТЫ ПОВЕРХНОСТЕЙ 60 ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОЦЕССОВ СТЕРИЛИЗАЦИИ
Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. ВЕЩЕСТВА, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ
3.2. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.3. ИСПОЛЬЗОВАННАЯ АППАРАТУРА
3.4. МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТОВ
3.4.1. БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД АНАЛИЗА
РАЗЛИЧНЫХ ОБРАЗЦОВ
3.4.1.1. Определение содержания АТФ в цельной крови и её 66 форменных элементах у подопытных животных, подвергавшихся поражающим воздействиям, и у человека
3.4.1.2. Определение антибиотикочувствительности крови при 70 бактериемии
3.4.1.3. Определение общей бактериальной обсемененности молока
3.4.1.4. Определение специфической обсемененности мороженого 73 или поверхностей технологического оборудования бактериями группы кишечной палочки
3.5. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА
3.6. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ПОЛУЧЕННЫХ 75 РЕЗУЛЬТАТОВ
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. СОДЕРЖАНИЕ АТФ В КРОВИ И ЕЁ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТАХ КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ОТДАЛЕННОГО ВО ВРЕМЕНИ ВОЗДЕЙСТВИЯ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ВНЕШНИХ ФАКТОРОВ
4.1.1. Влияние ксенобиотиков и/или радиации на содержание АТФ в эритроцитах и нейтрофилах крови крыс
4.1.2. Содержание АТФ в нейтрофилах и цельной крови у обследованных женщин, проживающих в селах Алтайского края
4.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КРОВИ ПРИ БАКТЕРИЕМИИ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ
4.2.1. Удаление немикробного АТФ из крови
4.2.2. Оптимизация условий гемолиза
4.2.3. Определение антибиотикочувствительности крови при бактериемии биолюминесцентным методом на примере модельной системы
4.2.4. Сравнение результатов определения величины относительного подавления роста микробных клеток под действием антибиотиков биолюминесцентным методом и методом посева разведений
4.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ СЫРОГО МОЛОКА БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ
4.3.1. Оптимизация условий обработки молока
4.3.2. Биолюминесцентное определение бактериальной обсемененности искусственно контаминированного молока
4.3.3. Биолюминесцентное определение общей бактериальной обсемененности сырого молока
4.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МЕТОДОМ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ОБРАЗЦОВ БАКТЕРИЯМИ ГРУППЫ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ
(НА ПРИМЕРЕ МОРОЖЕНОГО И ПОВЕРХНОСТЕЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ)
V. ВЫВОДЫ
VI. ПРИЛОЖЕНИЕ
УП. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

апиразы в тритоне Х-100 [129-132], либо инкубируют мочу в питательной среде в течение 1-4-2 часов и по увеличению суммарного содержания АТФ в образце за время инкубирования судят об исходном уровне обсемененности образца [128].
Несмотря на многообразие методических подходов при биолюминесцентном определении бактериурии исключить ложноположительные и ложноотрицательные результаты невозможно, так как: 1) из-за агрегации бактерий в моче на агаризованной питательной среде одна КОЕ может вырастать из нескольких клеток [124], что увеличивает расхождение с биолюминесцентным методом; 2) метод посева разведений, принятый в качестве эталонного, не позволяет выявлять в моче все анаэробные, медленнорастущие, со сложными пищевыми потребностями микроорганизмы [130];
3) невозможно учесть влияние химиотерапии урогенитальных инфекций на содержание бактериального АТФ в моче [124]; 4) биолюминесцентный метод в существующих модификациях не позволяет правильно идентифицировать бактериурию у больных гематурией [130].
2.1.3. Мониторинг концентрации антибиотиков в клинических образцах, определение величины минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков, постантибиотических эффектов
Для эффективного лечения инфекционных болезней в крови больного необходимо поддерживать некоторый постоянный уровень антибиотика. В клинической практике обычно определяют минимальное (перед введением) и максимальное (через 1-4-2 ч после введения) содержание антибиотика в сыворотке крови больного. Для этих целей используют микробиологические и инструментальные методы: диффузии в агар с использованием дисков [171], радиоферментный анализ, радиоиммунный анализ, неизотопный иммуноанализ, хроматографию (ВЭЖХ) [133]. К недостаткам этих методов относятся: продолжительность анализа (164-18 ч) - у метода диффузии в агар, высокая