Роль криоповреждения субклеточных структур в нарушении синтеза белка бесклеточной системы из печени крыс

• Автор: Загнойко, Виктор Иванович
• Шифр специальности: 03.00.22
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Харьков
• Количество страниц: 148 c. : ил

РАЗДЕЛ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. РЕГУЛЯЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ В КЛЕТКАХ ЭУКАРИОТОВ
ГЛАВА 2. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ БЕЛОКСИНТЕЗИРУЩЕГО АППАРАТА КЛЕТКИ ПРИ ЗАМОРАЖИВАНИИ-ОТТАИВАНИИ
ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ ЗАМОРАЖИВАНИЯ-ОТТАИВАНИЯ НА ЛИ30СОМЫ И МИТОХОНДРИИ
РАЗДЕЛ П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1. Методы выделения субклеточных структур и тканевых препаратов
1.2. Бесклеточная белок-синтезирующая система из клеток печени крыс
1.3. Методы, применявшиеся для очистки ингибитора белкового синтеза
1.4. Методы изучения структуры мембран
1.5. Аналитические методы
1.6. Постановка криобиологических исследований
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И
ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 2. ВКЛАД СУБКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ В НАРУШЕНИЕ
ПРОЦЕССОВ БИОСИНТЕЗА ВЕЖА ПРИ ЗАМОРАЖИВАНИИ-ОТТАИВАНИИ

ГЛАВА 3. ВЗАИМОСВЯЗЬ СТЕПЕНИ СТРУКТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ЛИ30С0М И МИТОХОНДРИЙ ПРИ ЗАМОРАЖИВАНИИ-ОТТАИВАНИИ И ВЫХОДА ИНГИБИТОРА БЕЛКОВОГО
СИНТЕЗА
ГЛАВА 4. ВЫДЕЛЕНИЕ И УСТАНОВЛЕНИЕ ПРИРОДЫ ИНГИБИТОРА ТРАНСЛЯЦИИ ИЗ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ
КРЫС
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ КРИОПРОТЕКТОРОВ НА ИНГИБИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ЛИ30С0М И МИТОХОНДРИЙ В ОТНОШЕНИИ БЕЛОК-СИНТЕЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ БЕСКЛЕТОЧНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ЗАМОРАЖИВАНИИОТТАИВАНИИ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Широкое применение в народном хозяйстве методов низкотемпературного хранения биологического материала позволило создать ряд высокоэффективных технологий криоконсервирования клеток крови, костного мозга, тканей, микроорганизмов и т.д. С 37, 55,62,64,95,100,1103 . Вместе с тем, несмотря на достигнутые успехи, становится ясным, что дальнейший прогресс в этом направлении невозможен без глубокого изучения фундаментальных биохимических механизмов, лежащих в основе процессов криоповреждения и репарации структур клетки. В настоящее время интенсивно развиваются экспериментальные исследования, касающиеся выяснения природы криолабильности и криорезистентности биологических мембран Г 10,12,111,178 3 , ферментных систем С 215,221,2273, выяснены некоторые общие закономерности механизмов криоповреждения и криопротекции клеточных суспензий С 11,43,62,63,164,173, 177
Одним из ключевых биохимических процессов клетки, определяющих ее функциональную полноценность и уровень репаративных возможностей, как известно, является биосинтез белка. Однако, как показывает анализ литературных данных, механизмы криоповреждения белок-синтезирующего аппарата клеток и особенности его функционирования после криоконсервации биологического материала изучены недостаточно. Имеются лишь единичные исследования^ которых изучалась суммарная белок-синтезирующая активность различных клеток и тканей в условиях замораживания С16,20-23,61,653 или криолабильность отдельных звеньев белок-синтезирующей системы - ДНП, РНП полирибосом и др. С 46-50,72,73,113,133,196,2363. Практически не освещенным до настоящего времени остается воп-

хароза имеет достаточно выраженные криопротективные свойства [643 , в связи с чем ее присутствие в пробах могло влиять на результаты экспериментов при выяснении эффектов замораживания и других изучавшихся факторов.
После выделения соответствующих субклеточных частиц или гомогената аликвоты суспензии по 2 мл помещали в полиэтиленовые контейнеры и замораживали по следующим программам:
1. Быстрое замораживание:
а Замораживание до - 196°С со скоростью 300-400°С/мин, отогрев со скоростью 1-3°С/мин. б Замораживание до - 196°С со скоростью 300-400°С/мин, отогрев со скоростью 70-80°С/мин.
2. Медленное замораживание:
а Замораживание до - 196°С со скоростью 1-3°С/мин, отогрев со скоростью 70-80°С/мин. б Замораживание до - 196°С со скоростью 1-3°С/мин, отогрев со скоростью 1-3°С/мин.
Контроль процессов замораживания осуществляли при помощи медь-константановой термопары.
Контрольные пробы хранили при 2-4°С.
После размораживания пробы подвергали центрифугированию при 20000 в течение 10 мин и супернатант использовали в эксперименте
Если пробы обрабатывали высокими концентрациями (rMu)zS0k или KCI, то перед внесением в систему их диализовали в течение 24 часов в растворе, содержащем 150мМ KCI и ГОмМ Трис-HCI буфера (рН-7,4).