Разработка клеточной технологии получения антигенов цестод : На примере Coenurus cerebralis и Echinococcus multilocularis

• Автор: Кленова, Инна Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 133 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Антигены цестод. Иммунодиагностика, иммунопрофилактика цестодозов
1.2. Биотехнологические методы получения антигенов
цестод
а) генно-инженерная технология;
б) клеточная технология
II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Культивирование клеток протосколексов
C. cerebralis и вторичных ларвоцист E. multilocularis в искусственных питательных средах
а) приобретение гельминтного материала, подготовка лабораторной посуды, различных материалов,
инструментов, растворов для проведения культуральной работы;
б) техника получения первичной клеточной культуры, культивирование клеток в искусственных питательных средах и отбор клеточных метаболитов
2.1.2. Экспериментальное заражение собак про-тосколексами C. cerebralis, приготовление онко-сферального секреторного антигена (ОСА);
2.1.3. Контроль клеточных метаболитов на стерильность и безвредность, определение содержания

белка в клеточных метаболитах
2.1.4. Определение специфических антигенов в клеточных метаболитах протосколексов
C. cerebralis:
а) иммуноферментной реакцией (ИФР);
б) реакцией иммунодиффузии в геле (РИД);
в) исследование сывороток экспериментально зараженных C. cerebralis овец ИФР в динамике инвазии
2.1.5. Иммунизация овец клеточными метаболитами («клеточным» антигеном) C. cerebralis и ОСА, получение сывороток в динамике иммунизации
2.1.6. Определение активности «клеточного» антигена протосколексов C. cerebralis и ОСА с иммунными сыворотками от овец:
а) ИФР;
б) РИД
2.1.7. Определение диагностически активных компонентов в «клеточном» антигене протосколексов C. cerebralis
2.1.8. Получение клеточных метаболитов вторичных ларвоцист E. multilocularis и определение специфических антигенов в клеточных метаболитах вторичных ларвоцист E. multilocularis:
а) ИФР
б) РИД
2.1.9. Определение диагностически активных компонентов в «клеточном» антигене E. multilocularis

2.1.10. Изучение иммунопрофилактических свойств «клеточного» антигена E. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе
2.1.11. Статистическая обработка полученных результатов
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Анализ данных по культивированию клеток протосколексов C. cerebralis и вторичных ларвоцист E. multilocularis
3.2. Результаты экспериментального заражения собак и получение онкосферального секреторного антигена (ОСА)
3.3. Характеристика и контроль клеточных метаболитов C. cerebralis и E. multilocularis
3.4. Иммунохимическая и иммуноферментная характеристика антигенов клеточных метаболитов C. cerebralis
3.5. Анализ сывороток овец, иммунизированных «клеточным» антигеном C. cerebralis и ОСА РИД
3.6. Иммуноферментный анализ сывороток овец, иммунизированных «клеточным» антигеном
C. cerebralis и ОСА
3.7. Диагностическая эффективность «клеточного» антигена C. cerebralis
3.8. Характеристика антигенов клеточных метаболитов E. multilocularis ИФР и РИД
3.9. Диагностическая эффективность «клеточного» антигена E. multilocularis

клеток и тканей животных, описанных в сборнике научных трудов «Методы культивирования клеток» под редакцией Г. П. Пинаева (1989), в книге «Биотехнология клеток животных», под редакцией Р. Е. Спиера и Дж. Б. Гриффитса (1989) и в учебно-методическом пособии «Культура клеток и тканей животных» (Дьяконов и др., 1980).
Для культивирования клеток использовали искусственные питательные среды типа: среда 199, ДМЕМ, БРМ1-1640, вы-
пускаемые фирмой «БиолоТ» г. Санкт-Петербург. В качестве ростового фактора в вышеуказанные среды добавляли эмбриональную сыворотку телят крупного рогатого скота, сыворотку лошади, изготовленные той же фирмой. При обработке гельминтного материала и получении клеточной суспензии использовали стерильные раствор Хенкса, физиологический раствор и бидистиллированную воду.
б) Техника получения первичной клеточной культуры, культивирование клеток в искусственных питательных средах, отбор клеточных метаболитов.
Работу с гельминтным материалом проводили в стерильном боксе в ламинаре с вытяжкой. Материал помещали в чашку Петри и отмывали физиологическим раствором с антибиотиками из расчета 2000 ЕД/мл пенициллина и 1 мг/мл стрептомицина не менее 3-5 раз и дважды стерильным физраствором. Отмытый материал подвергали измельчению ножницами, фильтровали через мельничный газ (диаметр ячеек 1 мм) и подвергали нежной гомогенизации в течение 5-7 мин в ручном гомогенизаторе с добавлением 0,5-1,0 мл стерильного раствора Хенкса до получения однородной массы. Полученную