Новая мутация рецептора прогестерона : Ее влияние на онтогенез, фертильность и функции рецептора

• Автор: Агульник, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 151 с.

1. ВВЕДЕНИЕ
П. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1 .Физиология стероидных рецепторов
2. Гомология между стероидными рецепторами
3.Функциональная характеристика различных районов стероидных рецепторов
4. Механизм гормональной активации
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Анализ экзонов 2-8 рецептора прогестерона
2. Сравнение частоты встречаемости PROGINS у здоровых женщин и пациенток с раком яичников и груди в китайской и немецкой популяциях
3. Сравнение встречаемости progins у здоровых женщин в популяциях с различной частотой заболевания раком яичников
4. Сравнение частоты встречаемости progins аллеля среди популяции
фертильных женщин и женщин с идеопатическим бесплоднием
5. Сравнительный функциональный анализ нормального и мутантного рецепторов прогестерона
5.1. Сродство нормального и мутантного рецепторов
прогестерона к лиганду
5.2. Определение количества рецептора в клетке
5.3. Сравнение транскрипционной активности
5.4. Динамика диссоциации лиганда и рецептора
5.5. Сравнение стабильности мутантного и нормального
рецепторов прогестерона
V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
VI. ВЫВОДЫ
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Рецептор прогестерона (ПР) играет решающую роль в развитии, дифференцировке и функционировании женской половой системы. У мышей с делецией гена рецептора прогестерона нарушены процессы дифференцировки молочной железы, овуляции, имплантации, отсутствует сексуальное поведение и затронута иммунная система (Lydon et al, 1996). Мутации в генах семейства рецепторов стероидных/тиреоидных гормонов приводят к ряду клинических проявлений, таких как микседема (рецептор гормона щитовидной железы) (Oppenhimer et al, 1979), ERKO синдром (рецептор эстрогена) (Korach et al, 1996), рак простаты и бесплодие у мужчин (рецептор андрогена) (Wilson et al, 1983, Patterson et al, 1994). По-видимому, вследствие того, что ПР исключительно важен для репродуктивных функций млекопитающих, отклонения от дикого типа в гене ПР встречаются чрезвычайно редко. До сих пор не было обнаружено мутаций в гене ПР человека. В представленной работе впервые описаны две новых мутации входящих в мутационный комплекс аллеля гена ПР, называемого PROGINS.
В настоящее время клонировано большинство рецепторов стероидных гормонов, определены их структура и функциональные районы. Установлено, что рецепторы стероидных гормонов издержат лиганд- и ДНК-связывающих домены, соединённые подвижным хиндж районом. Для некоторых рецепторов картированы также районы, ответственные за транскрипционную активацию и
репрессию (Meyer et al, 1992, Sartorius et al, 1994); сигналы ядерной транслокации (Guiochon-Mantel et al, 1989), гомо - и гетеро-димеризации (Tetel et al, 1997), участки связывающие ко-репрессоры, ко-активаторы и молекулярные чапероны (Jakson et al, 1997). Изучение мутантного варианта ПР позволит точнее установить значимость районов, в которых произошла мутация, для различных ступений взаимодействия и функционирования рецептора и лиганда. Такой подход использовался и для анализа других стероидных рецепторов. В данной работе сочетается изучение физиологических последствий наличия мутации на уровне целостного организма и функциональных отличий на уровне рецептора.
Ранее было показано, что в популяции здоровых женщин существует вариант гена ПР с инсерцией Alu повтора в интрон G гена рецептора прогестерона, называемый PROGINS (PROGesteron gene INSertion) (Fuqua et al, 1991). Мы предположили, что дополнительные изменения в кодирующей части гена ПР могут изменить функции рецептора и, таким образом, повлиять на риск заболевания раком груди или яичников. Естественно ожидать, что изменения в рецепторе могут также повлиять на репродуктивную функцию, иммунную систему, процессы развития и дифференциации тканей экспрессирующих ПР.
Цель работы.

димеризации принимает активное участие и так называемый хиндж участок. Первоначально считалось, что хиндж участок является гидрофильной, неконсервативной последовательностью аминокислот, обеспечивающей подвижное соединение между ДНК- и лиганд-связывающими участками, не имеющей иных функций (Evans 1998). Однако, в случае ядерного рецептора ROR а, хиндж участок необходим для правильной ориентации ДНК-связывающего района, приводящей к максимальному изменению третичной структуры таргетной ДНК (McBroom et al 1995). Было также показано, что хиндж участок необходим для гомодимеризации ДНК в растворе. Используя делеционные варианты ПР, было установлено, что лиганд-связывающий и хиндж участки представляют собой минимальную часть рецептора, способную к димеризации (Tetel et al 1997).
4. МЕХАНИЗМ ГОРМОНАЛЬНОЙ АКТИВАЦИИ
Стероидные гормоны воздействуют на организм посредством своих рецепторов Связывание стероидных агонистов и антагонистов со стероидными рецепторами вызывает конформационные изменения (Moudgil et al 1989, Allan et al 1992) и инициирует цепь событий, вовлекающих рецептор: связывание лиганда, диссоциацию с хит шок белками, димеризацию, ядерную транслокацию, связывание со специфической последовательностью ДНК, формирование активного транскрипционного комплекса. Картирование функциональной