Молекулярно-генетический анализ генома животных и человека с использованием ДНК-маркеров

• Автор: Сулимова, Галина Ефимовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 212 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
2. СТРУКТУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. ОБЩИЙ АНАЛИЗ ГЕНОМА: СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНОМА BOS TAURUS
3.1.1. Материалы и методы
3.1.2. Термическое фракционирование ДНК и характеристика АТ- и GC-обогащенных фракций
3.1.3. Анализ транскрипционной активности генома в разных органах Bos taurus на основе кинетики гибридизации поли(А)-мРНК с кДНК
3.1.4. Заключение
3.2. АНАЛИЗ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ЛОКУСОВ: ГЕНЫ КАЗЕИНОВ И ГЕНЫ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ У ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ПОДСЕМЕЙСТВА BOVINAE
3.2.1. Материалы и методы
3.2.2. Сравнительная характеристика полиморфизма ДНК генов
казеинов у представителей подсемейства Bovinae
3.2.2.1. Полиморфизм гена бета-казеина у крупного рогатого скота
3.2.2.2. Сравнительный анализ полиморфизма гена каппа-казеина
у представителей подсемейства Bovinae
3.2.2.3. Заключение
3.2.3. Сравнительная характеристика полиморфизма ДНК генов главного комплекса гистосовместимости у крупного
рогатого скота
3.2.3.1. Сравнительная характеристика полиморфизма локусов DRB
и DQB на основе ПЦР-анализа области, кодирующей Ы -домен
3.2.3.2. Сравнительный анализ уровня полиморфизма функционально различных областей гена DQB
3.2.3.3. Анализ генетического сходства и генетических расстояний исследованных популяций на основе данных по полиморфизму генов DRB и DQB
3.2.3.4. Заключение
3.2.4. Возможности практического применения ДНК-маркеров, полученных на основе гена каппа-казеина и гена
BOLA-DRB3
3.2.4.1. Создание ДНК-маркеров на основе гена каппа-казеина (ПЦР-ПДРФ маркеры, аллель-специфичные маркеры), пригодных для использования в селекционных программах по улучшению качества молока

3.2.4.2. Генотипирование аллелей гена BoLA-DRB3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу
3.2.4.3. Заключение.
3.3. АНАЛИЗ ОТДЕЛЬНЫХ ХРОМОСОМ: ДНК-МАРКЕРЫ ХРОМОСОМ 3 И 13 ЧЕЛОВЕКА.
3.3.1. Материалы и методы.
3.3.2. Создание STS-маркеров на основе последовательностей, прилегающих к Notl-сайтам хромосомы 3 человека.
3.3.3. Создание EST-маркеров на основе библиотеки кДНК человека, обогащенной последовательностями хромосомы 13 человека.
3.3.4. Заключение.
3.4. АНАЛИЗ ОТДЕЛЬНЫХ ОБЛАСТЕЙ ГЕНОМА: КАРТИРОВАНИЕ РАЙОНА 13q14.3 ХРОМОСОМЫ 13 ЧЕЛОВЕКА, ЧАСТО УТРАЧИВАЕМОГО ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ В-КЛЕТОЧНОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ.
3.4.1. Материалы и методы.
3.4.2. Построение физической карты области 13q14.3 генома человека на основе вставок мега- и мидиУАС-клонов
3.4.2.1. Скрининг YAC-библиотеки ICRF генома человека по маркерам RBKpt, MGG15 и D13S25.
3.4.2.2. ПЦР анализ мегаУАС клонов библиотеки СЕРН по маркерам RBKpt, MGG15 и D13S25.
3.4.2.3. Создание STS маркеров на основе концевых участков вставок в YAC.
3.4.2.4. ПЦР-анализ 19 YAC-клонов по 10 STS-маркерам из области 13q14.3.
3.4.2.5. ПЦР-анализ построенного кон ти га YAC-клонов с WI-STS-маркерами и маркером AFM301WB5.
3.4.3. Заключение
4. ВЫВОДЫ

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. С 1953 года, когда было показано,что материальным носителем гена является ДНК, генетика получила новый импульс для своего развития. На передний план выдвигаются исследования на молекулярном уровне структурной организации гена и генома в целом, что позволило перейти и к изучению механизмов функционирования генов. Исследования генома с использованием молекулярно-генетических методов привели к быстрым успехам в первую очередь на прокариотах. Сведения о молекулярной структуре генома высших эукариот к началу данного иследования (конец 60-х годов) практически отсутствовали. Прогресс в молекулярногенетическом анализе генома эукариот сдерживался не только высокой сложностью их, но и отсутствием достаточного количества удобных и информативных маркеров.
Для создания генетических маркеров использовались различные методические подходы. Наиболее эффективными оказались молекулярные методы, позволившие создать тест-системы на уровне продуктов генов (белковый полиморфизм), а позднее на уровне генетического материала клетки (полиморфизм ДНК). Более 25 лет наиболее широко использовались маркеры, полученные на основе белкового полиморфизма. С их помощью был сделан настоящий прорыв в исследованиях попу-
Общее число разнообразных видов молекул мРНК в поли-сомах печени, почек и селезенки и тотальной поли(А)-мРНК лак-тирующей молочной железы коровы составляет около 9300, 10200, 7200 и 9100 (при уровне чувствительности метода более 10 молекул на клетку), что соответствует числу транскрибируемых в этих органах генов [Сулимова и др., 1979; Городецкий и др., 1982, 1984; Попендиките и др., 1984]. Уровень транскрипции различных генов неодинаков: в Составе исследованных популяций мРНК выявлены дискретные классы молекул, различающиеся по сложности нуклеотидных последовательностей и их концентрации в клетке (табл.1). Особенно четко это видно на такой специализированной ткани как лактирующая молочная железа (рис.6).

Печень Почки Селезенка Молочная железа
Число копий мРНК каждого вида из разных органов.
Рис. б. Анализ данных по гибридизации кДНК с гомологичными поли(А)-мРНК из разных органов Bos taurus.