Анализ модулирующего действия ΔΨ на работу некоторых систем активного транспорта в плазматических мембранах клеток высших растений

• Автор: Орлова, Ольга Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 135 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
Глава 1. Потенциал покоя клеток высших растений и его
функциональное значение
1.1. Природа потенциала покоя клеток высших растений II
1.1.1. Особенности потенциала покоя плазмалеммы
1.1.2. Природа пассивной компоненты потенциала покоя
1.1.3. Природа активной компоненты потенциала покоя
1.2. Роль потенциала покоя в функциональной активности плазмалеммы
1.2.1. Потенциал покоя и физико-химическое состояние плазмалеммы
1.2.2. Потенциал покоя как регулятор пассивной проницаемости плазмалеммы
1.2.3. Потенциал покоя и работа первичных активных транспортных систем
1.2.4. Потенциал покоя и вторичный активный транспорт
1.2.5. Роль потенциала покоя в работе мембраносвязанных ферментов
Глава 2. Объекты и методы исследования
2.1. Выделение фракции, обогащенной плазматическими мембранами, методом дифференциального
ультрацентрифугирования
2.2. Формирование искусственного Д|/ на мембранах с
помощью К*-диффузионного потенциала
2.3. Определение Дц,I и ДрН во фракции изолированных плазматических мембран методом флуоресцентных зондов
2.3.1. Измерение Др с помощью флуоресцентных зондов
АНС', ДСМ и сКз-С3-(5)
2.3.2. Измерение ДрН с помощью флуоресцентного
зонда 9-аминоакридина
2.3.3. Определение ЭН-групп с помощью зонда
флуоресцеинмеркутиацетата
2.4. Определение АТФазной активности во фракции изолированных плазматических мембран
2.4.1. Спектрофотометрический метод определения АТФазной активности с помощью
малахитового зеленого
2.4.2. Определение АТФазной активности методом
Лоури-Лопец
2.4.3. Люциферин-люциферазный метод определения
АТФазной активности
2.5. Изучение вторичного активного транспорта сахарозы
2.5.1. Метод турбидиметрии
2.5.2. Метод миллипоровой фильтрации
2.5.3. Изучение транспорта сахаров в частично изолированных проводящих тканях растений по характеру биоэлектрических реакций
2.6. Определение белка во фракции изолированных плазматических мембран методом Лоури
2.7. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Стабилизирующая роль АТФ-зависимого Н+-насоса в электрогенезе
плазматических мембран клеток высшего растения
3.1. Способность везикул генерировать пассивную компоненту потенциала покоя (Ду0), представленную IС-
диффузионным потенциалом
3.2. Способность везикул генерировать активную (АТФ-зависимую) компоненту потенциала покоя
3.3. Стабилизирующая роль активной компоненты потенциала покоя
в электрогенезе везикул плазматических мембран
Глава 4. Модулирующее влияние К"-диффузионного потенциала на
гидролитическую активность Н+-АТФазы плазматических мембран
высшего растения в различных условиях
4.1. Влияние мембранного потенциала на гидролитическую
4.2. Влияние мембранного потенциала на гидролитическую активность Н+-АТФазы при пониженной температуре (6°С)
4.3. Усиление влияния мембранного потенциала на гидролитическую активность Н+-АТФазы у растений, подвергнутых холодовому закаливанию
Глава 5. Исследование роли мембранного потенциала во вторичном активном транспорте сахарозы в плазматических мембранах клеток высших растений
5.1. Исследование биоэлектрических реакций клеток проводящих тканей высшего растения при
транспорте сахарозы
5.2. Изучение потенциал-зависимости транспорта сахарозы на везикулах плазматических мембран
5.3. Анализ изменений мембранного потенциала, индуцированных транспортом сахарозы в везикулах плазмалеммы
5.4. Влияние К*-диффузионного потенциала на конформационное состояние переносчика сахарозы везикул плазматических мембран (по анализу содержания свободных SH-групп)
Заключение
Выводы
Литература

Рис. 1. АТФазная активность ПМ клеток стебля тыквы при разных условиях инкубации (оценка инвертированности везикул). 1 - состав среды: 250 мМ сахарозы; 2 мМ Трис-малеат pH 6,0; 3 мМ MgS04; 50 мМ KCI; 3 мМ АТФ.
2 - состав среды как в 1, мембраны предварительно проинкубированы с аламетицином (5 мМ). Концентрация мембранного белка ~ 25 мкг.
Рис.2. АТФазная активность клеток стебля тыквы при различных значениях pH среды инкубации. Состав среды: Трис-НСІ буфер; 3 мМ MgS04; 50 мМ KCI; 3 мМ АТФ. Концентрация мембранного белка ~ 30 мкг. п=5.