Динамика ядрышка в клеточном цикле диплоидных и полиплоидных клеток различных тканей пшеницы Triticum aestivum L

• Автор: Лазарева, Елена Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Место защиты: Б. м.
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Структурно-функциональная характеристика локусов организатора ядрышка
2. Структурная организация ядрышка
3. Молекулярная композиция доменов ядрышка
3.1. Локализация ДНК
3.2. Белки ядрышка и их локализация
4. Динамика ядрышка в клеточном цикле
4.1. Белки, ассоциированные с районом ядрышкового организатора
4.2. Белки периферического слоя хромосом. Структурно-функциональная характеристика периферического хромосомного материала (матрикса), как специфического домена митотических хромосом
4.3. Белки ядрышка, мигрирующие во время митоза в цитоплазму
5. Нуклеологенез
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Клетки апикальной меристемы корня
1.1. Приготовление препаратов хромосом
1.2. Выявление аргентофилъных белков в клетках корневой меристемы
1.3. Визуализация ядрышек на различных стадиях клеточного
цикла
2. Клетки эндосперма
2.1. Изоляция эндосперма
2.2. Выявление аргентофилъных белков в клетках эндосперма
2.3. Иммунофлуоресцентное окрашивание
2.4. Окрашивание ядер клеток эндосперма по методу Фельгена
3. Определение молекулярной массы аргентофилъных белков
4. Определение молекулярной массы белков ядрышка -антигенов к аутоиммунным сывороткам
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Локализация аргентофильных белков ядра в интерфазных и митотических клетках апикальной меристемы корня и эндосперма пшеницы
1.1. Выявление аргентофильных белков клеток апикальной меристемы корня
1.2. Локализация аргентофильных белков в интерфазных и делящихся клетках эндосперма
1.3. Обсуждение
2. Иммуноцитохимическое изучение локализации некоторых белков ядрышка в интерфазных и митотических клетках эндосперма
2.1. Определение молекулярной массы белков ядрышка, являющ ихся антигенами к аутоиммунным сывороткам Р-127 и К
2.2. Иммуноцитохимическое выявление полипептида с мол массой 34 кД (сыворотка К
2.3. Иммуноцитохимическое выявление белка с мол массой 53 кД (сыворотка Р-127)
2.4. Обсуждение
3. Динамика структурно-функциональной ассоциации ядрышкообразующих хромосом в клеточном цикле и в связи с полиплоидизацией генома
3.1. Количество хромосом с ядрышкообразующими районами в митотических клетках меристемы корня
3.2. Количество ядрышек в ядрах диплоидных и эндополиплоид-ных клеток меристемы корня на различных стадиях клеточного цикла
3.3. Количество ядрышек в клетках антипод с политенными хромосомами
3.4. Количество ядрышек в триплоидных клетках эндосперма на различных стадиях клеточного цикла
3.5. Ранние этапы нуклеологенеза в постмитотических клетках эндосперма
3.6. Обсуждение ЗАКЛЮЧЕНИЕ ’“ЫНОДЫ
БИБЛИОГРАФИЯ

ВВЕДЕНИЕ
Ядрышко представляет собой дискретный домен интерфазного ядра эукариот, в котором осуществляется интенсивная транскрипция рибосомной РНК и ее процессинг (Scheer, Benavente, 1990).
Интерфазное ядрышко включает три основных структурных компонента: фибриллярные центры (ФЦ), плотный фибриллярный компонент (ПФК) и гранулярный компонент (ГК) (Goessens, 1984). По современным представлениям, в ФЦ локализованы гены рРНК и некоторые белки, необходимые для транскрипции РНК - РНК полимераза I, транскрипционный фактор UBF и топоизомераза I. ПФК является сайтом транскрипции рРНК и содержит такие белки, как нуклеолин; в ГК локализованы процессирующиеся молекулы РНК и предшественники рибосом и белки, участвующие в транспорте и созревании рибосом - нуклеолин, В23, и Р52 (Scheer, Benavente, 1990; Hernandez-Verdun, 1991; Shaw, Jordan, 1995; Gautier et al., 1994).
Количество и размеры ядрышек в различных типах клеток коррелирует с числом активных ядрышковых организаторов (ЯО) (Schwarzacher, Wachtier, 1983). В то же время, количество ядрышек в ядре может быть меньше, чем число активных ЯО (Jordan et al, 1982; Wachtler et al, 1986; Rawlins, Shaw, 1990). Этот феномен авторы объясняют специфической ассоциацией ядрышкообразующих хромосом в области ЯО, которая может сохраняться в метафазе (Avivi, Feldman, 1980; Rawlins, Shaw, 1990; Wachtler et al, 1986; Hadlaczky et al, 1986; Haaf et al, 1990; Haaf, Schmid, 1991). Причины, определяющие формирование такой ассоциации, ее динамика в клеточном цикле и в связи с полиплоидизацией генома, так же, как

методов показано, что по типу распределения в митотических клетках белки ядрышка можно условно разделить на три основные группы: (1) белки, мигрирующие в цитоплазму; (2) белки,
ассоциированные с поверхностью хромосом и (3) белки, ассоциированные с л оку сом ЯОР.
4.1. Белки, ассоциированные с районом ядрышкового организатора.
К этой группе относятся белки, входящие в состав транскрипционного комплекса: РНК полимераза1 (Scheer, Rose, 1984; Haaf et al., 1988; Gilbert et al., 1995), фактор инициации транскрипции UBF (Chan et al., 1991; Rendon et al., 1992; Roussel et al., 1993; Zatsepina et al., 1993), ТАТА-связывающий белок (TBF) и TBF-ассоциированные факторы, связанные с фактором транскрипции SL1 (Jordan _et al., 1996; Roussel et al., 1996). С областью ЯОР связаны, так же, ДНК топоизомераза 1 (Guldner et al., 1986) и белок 135 кД (Pfeife et al., 1986).
Предполагается, что в митотических хромосомах транскрипционный комплекс остается ассоциированным с промоторами рибосомных генов (Roussel et al., 1996). Таким образом, хотя в митозе синтез рРНК отсутствует, группа белков, принимающая непосредственное участие в транскрипции рибосомных генов, остается ассоциированной с ДНК-матрицей. Следовательно, рибосомные гены, активированные к транскрипции, но не экспрессирующиеся, находятся как бы в "замороженном" состоянии. Возможно, экспрессия генов рРНК в течение митоза блокирована на стадии элонгации транскрипции; принципиальная возможность регуляции такого типа показана для генов,