Питательная среда для выделения Yersinia Pseudotuberculosis

• Автор: Татарникова, Ольга Георгиевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 128 с.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ЕЕ Физиологические особенности возбудителя псевдотуберкулеза и сопутствующей ему в патологическом материале микрофлоры
Е2. Питательные среды для выделения и культивирования псевдотуберкулезного микроба
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Штаммы
2.2. Реактивы, питательные основы, питательные среды
2.3. Биохимические методы
2.4. Биологические методы
2.5. Физико-химические методы
2.6. Статистические методы
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА
3.1. Дыхательная активность псевдотуберкулезного микроба в динамике роста при температуре культивирования 28 и 37 °С
3.2. Влияние на редукцию 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого псевдотуберкулезным микробом соотношения питательных основ и содержания в них аминного азота
3.3. Влияние химических соединений на способность псевдотуберкулезного микроба к редукции 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого
3.4. Ингибиторы посторонней микрофлоры
3.5. Другие факторы роста
ГЛАВА 4. ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОГО МИКРОБА
4.1. Состав питательной среды, технология ее приготовления
4.2. Физико-химические показатели среды
4.3. Биологические свойства среды
4.4. Дыхательная активность псевдотуберкулезного микроба, выращенного на сконструированной среде
4.5. Стабильность основных свойств питательной среды для выделения псевдотуберкулезного микроба при хранении
ГЛАВА 5. ИСПЫТАНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ СКОНСТРУИРОВАННОЙ СРЕДЫ В ЛАБОРАТОРНЫХ И ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ (акты испытания сконструированной питательной среды)
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Проблема псевдотуберкулеза в последние два десятилетия становится все более глобальной в плане как территориального распространения, так и интенсивности охвата населения. Эпидемические вспышки псевдотуберкулезной инфекции, возникающие в организованных коллективах, предприятиях общественного питания в разных странах мира, наносят значительный социально-экономический ущерб. В связи с выраженным полиморфизмом клинического течения заболевания лабораторная диагностика псевдотуберкулеза имеет решающее значение. При этом наряду с современными диагностическими методами - полимеразной цепной реакцией, иммунологическим исследованием - классическим и основным доказательством этиологической роли микроорганизма в возникновении инфекционного заболевания остаются выделение и идентификация возбудителя.
В настоящее время для выделения Yersinia pseudotuberculosis применяют дифференциально-диагностические питательные среды, предложенные Г.Д. Серовым с соавт. [69], Г.Я. Ценевой с соавт. [88, 90], среду Эндо, питательную среду для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза Государственного научного центра прикладной микробиологии (ГНЦПМ, г. Оболенск) [68] и другие. Псевдотуберкулезный микроб вырастает на этих средах, как правило, не ранее чем через 48-72 ч, что увеличивает сроки его выделения и идентификации. Из перечисленных сред только среды Эндо и ГНЦПМ являются средами промышленного изготовления и выпускаются в обезвоженном виде, что значительно упрощает их приготовление на этапе применения. Остальные питательные среды готовятся непосредственно в бактериологических лабораториях, что нередко оказывается затруднительным, особенно в полевых условиях, из-за необходимости подбора питательной основы, введения в основу компонентов среды, корректировки pH, фильтрации, стерилизации. Вследствие этого они менее стандартны, имеют небольшой срок хранения. Кроме того, в состав некоторых пита-

воре натрия хлорида, 0.5 мл 0.1 %-ного раствора ТТХ, 0.5 мл раствора субстрата. В качестве субстратов использовали глюкозу (25 мкМ), компоненты цикла Кребса - цитрат (100 мкМ), а-кетоглутарат (100 мкМ), сукцинат (100 мкМ), фумарат (100 мкМ), малат (200 мкМ).
Для определения влияния на редукцию ТТХ бромтимолового синего (БТС) использовали культуру У. рхеиАоШЪегсиНоьгз И-199, выращенную в течение 24 ч при температуре 28 °С на питательной среде для культивирования чумного микроба, серия 19. Субстратом являлась глюкоза. Параллельно осуществляли опыты с пробами, в состав которых дополнительно вводили 0.128, 0.064 и 0.032 мг БТС.
Пробы инкубировали при температуре (37+1) °С в течение 30 мин, обрабатывали охлажденным подкисленным ацетоном (3.5 мл), фильтровали. Оптическую плотность регистрировали на микропланшетном фотометре М11-580 (США) при А,=508 нм. В качестве контроля (эндогенное дыхание) использовали пробу, не содержащую субстрат. Количество восстановленного ТТХ (формазана) рассчитывали по калибровочной кривой.
2,4. Биологические методы.
Ростовые свойства сконструированной среды определяли и оценивали в соответствии с "Методическими рекомендациями к контролю питательных сред по биологическим показателям" [48]. При этом изучали чувствительность среды, скорость и эффективность роста псевдотуберкулезного микроба, морфологию колоний, стабильность основных свойств культур, ингибирующие и дифференцирующие свойства среды. На этапах конструирования питательной среды и при оценке ее качества определяли также жизнеспособность выращенных культур.
При проведении этих исследований испытуемую питательную среду готовили путем растворения навески, необходимой для приготовления среды конкретной серии, в 1 л дистиллированной воды, нагревания при перемешивании до кипения, кипячения в