Олигоспоровые актиномицеты в почвах разных типов

• Автор: Михайлова, Наталия Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 150 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Экология олигоспоровых актиномицетов
1.2. Прикладное значение олигоспоровых актиномицетов
1.3. Место представителей олигоспоровых актиномицетов
в системах классификаций
1.4. Методы выделения актиномицетов из природных субстратов
1.4.1. Этапы выделения микроорганизмов
1.4.2. Методы, основанные на подавлении роста сопутствующих организмов
1.4.3. Методы, основанные на особенностях спор
1.4.4. Методы, основанные на особенностях
вегетативных клеток
1.4.5. Применение метода РС11 для выявления
и идентификации актиномицетов в почвах и других субстратах
1.4.6. Другие методы выявления, изоляции
и идентификации актиномицетов в почвах
1.4.7. Селективное выделение олигоспоровых
актиномицетов из природных источников
1.4.8. Методы выявления комплекса актиномицетов
в ходе инициированных сукцессий
Глава И. ОБЪКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод фаготипирования для выявления
актиномицетов в почве

2.2.2. Метод посева из разведений почвенных суспензий для учета и выделения олигоспоровьгх актиномицетов
2.2.3. Методы идентификации актиномицетов
2.2.4. Сукцессионный анализ
Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Численность и доля олигоспоровых актиномицетов
в комплексе почвенных мицелиальных прокариот
3.2. Частота встречаемости олигоспоровых
актиномицетов в почвах
3.3. Вертикально-ярусное распределение
олигоспоровых актиномицетов в биогеоценозах
3.4. Динамика численности популяций
олигоспоровых актиномицетов в ходе сукцессии
3.5. Выявление олигоспоровых актиномицетов
в различных типах почв методом фаготипирования
3.6. Сравнительная характеристика методов, использованных для выявления олигоспоровых актиномицетов
в различных типах почв
3.7. Выявление некоторых родов олигоспоровых актиномицетов с применением предобработки
почвенных образцов растворами хлорамина Б
Глава IV ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВЫДЕЛЕННЫХ КУЛЬТУР
АКТИНОМИЦЕТОВ
Глава V ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
Описание исследованных почв
ЛИТЕРАТУРА

ВВЕДЕНИЕ
• Актуальность темы. В настоящее время группа актиномицетов и родственных им организмов насчитывает более 100 родов. Однако, до последнего десятилетия считалось, что наиболее распространенными в почве являются актиномицеты родов Streptomyces и Micromonospora. Использование селективных методов выявления позволяет обнаружить и другие, считавшиеся редкими роды актиномицетов.
Олигоспоровые актиномицеты — понятие не таксономическое. Под олигоспоровыми актиномицетами подразумевают группу родов, представители которых характеризуются наличием коротких цепочек спор (не более десяти) на воздушном (реже на воздушном и субстратном) мицелии, причем диаметр спор превышает диаметр гиф.
Имеются сведения об обнаружении олигоспоровых актиномицетов родов Thermomonospora, Saccharopolyspora, Saccharomonospora в саморазогревающихся субстратах и в почвах южных зон (чернозем, каштановая почва). Однако закономерности распределения этих мицелиальных прокариот в наземных экосистемах не исследованы и неизвестна их доля в актиномицетном комплексе различных почв. Среди олигоспоровых актиномицетов много продуцентов ценных биологически активных веществ: антибиотиков, витаминов, ферментов и др. Они образуют внеклеточные ферменты гидролазы и участвуют в разложении целлюлозы, хитина, гумусовых веществ в почве (The Prokaryotes, 1991).
• Целью работы было выявление закономерностей распределения олигоспоровых актиномицетов в различных типах почв и по вертикальной структуре основных типов биогеоценозов для установления экологического статуса этих мицелиальных прокариот.
• Задачи исследования:
1. Разработка и подбор методических приемов селективного выделения олигоспоровых актиномицетов из почв и растительных субстратов.
2. Определение численности, пространственной и временной локализации олигоспоровых актиномицетов в почвах основных природных зон России и стран СНГ, а также в некоторых почвах Мексики, Монголии и Аргентины.

зачатков (1,6 g в течение 20 минут). В супернатанте остаются споры актиномицетов, в осадке — споры и вегетативные клетки грибов и немицелиальных прокариот. Метод дифференциального центрифугирования применяли для выделения представителей родов Streptomyces, Thermoactinomyces, Thermomonospora, Micromonospora, Saccharopolyspora и Frankia (Чормонова. 1978). Для выделения представителей рода Micromonospora почву подвергали центрифугированию в градиенте плотности хлорида цезия (Hirsch et al., 1982).
Учитывая гидрофобность спорулирующего воздушного мицелия актиномицетов, Маккар и Кросс предложили выделять представителей рода Actinoplanes методом флотации (Калакуцкий, Зенова, 1984).
Среди описываемой группы методов можно назвать также обработку почвенных суспензий ультразвуком при частоте 22 кГц и силе тока 0,4 А в течение 2 минут (Гаузе и др., 1976) с целью десорбции спор и мицелия актиномицетов с поверхности почвенных частиц.
Споры актиномицетов оказываются устойчивыми не только к воздействию названных выше физических факторов, но и проявляют повышенную по сравнению с вегетативными клетками устойчивость к воздействию химических реагентов. Учитывая это свойство, суспензии почв перед высевом на питательные среды обрабатывали 1 % раствором фенола или этанолом 25 % — 45 минут или 50 % в течение одного часа. Вегетативные формы при этом разрушались. Применялась также предварительная обработка щелочью — 0,01 н NaOH, 5-10 минут при 15°С.
Японскими исследователями (Hayakawa et al., 1997) был предложен метод селективного выделения актиномицетов, принадлежащих семейству Streptosporangiaceae (Microbispora, Microtetraspora, Streptosporangium и Herbidospora). Он заключался в приготовлении суспензии из воздушно-сухой почвы на основе 1% раствора хлорамина Т с последующим посевом на HV-arap. Предобработка раствором хлорамина Т позволяла подавить рост немицелиальных прокариот и нежелательных актиномицетов на чашках.