Видоспецифические антигенные эритроцитарные диагностикумы для определения антител к Rickettsia prowazekii и Rickettsia typhi

• Автор: Ковалева, Татьяна Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список основных сокращений
Введение
Г лава Т. Основные принципы конструирования
антигенных риккетсиальных эритроцитарных диагностикумов (обзор литературы)
1Л. Реакция непрямой гемагглютинации
1.2. Основные принципы приготовления АЭД
1.3. Особенности сенсибилизации эритроцитов
антигенами полисахаридной и белковой природы
1.4. Место РНГА среди регламентированных серологических тестов и ее диагностические возможности
1.5. Антигенная структура риккетсий группы СТ
Глава II. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2. Методы 34 Глава III. Разработка методов конструирования АЭД
на основе разных сенситинов, полученных из риккетсиальной клетки
3.1. Выбор основы для получения
полноценных гемосенситинов
3.2. Приготовление поверхностных
риккетсиальных антигенов и их характеристика
3.2.1. Изучение иммунохимических свойств
поверхностных и мембранных антигенов
3.2.2. Оценка гемосенсибилизирующих свойств
поверхностных и мембранных антигенов
3.2.3. Определение серологических свойств СЭ
на основе поверхностных и мембранных антигенов
3.3. Разработка антигенного эритроцитарного
диагностикума на основе группового сенситина
3.3.1. Получение диагностических сывороток
и изучение динамики антителообразования с помощью группового АЭД.
3.4. Получение видоспецифического сенситина
3.4.1. Приготовление иммуносорбента для
адсорбции групповых специфических антител
3.4.2. Выделение видоспецифических антигенных
комплексов риккетсий (ВАКР) и их характеристика
3.5. Разработка видоспецифических АЭД на
основе ВАКР Rprowazekii и R. typhi
3.6. Оценка диагностических возможностей
полученных АЭД
3.7. Аспекты дальнейшего использования разработанной
методики получения видоспецифических АЭД Глава IV. Заключение Выводы
Библиографический список использованной литературы

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.
АЭД - антигенный эритроцитарный диагностикум ВАЭД - видоспецифический антигенный эритроцитарный диагностикум
ВАКР - видоспецифические антигенные комплексы риккетсий
ГС А - гемосенсибилизирующая активность
ЖЭСД - жидкий эритроцитарный сыпнотифозный диагностикум
ИЭД - иммуноглобулиновый эритроцитарный диагностикум
КГЩ - клещевая пятнистая лихорадка
МАКР - мембранные антигенные комплексы риккетсий
нМФА - непрямой метод флуоресцирующих антител
ПАКР - поверхностные антигенные комплексы риккетсий
РА - реакция агглютинации
РНАг - реакция нейтрализации антигена
РНГА - реакция непрямой гемагглютинации
РСК - реакция связывания комплемента
РТНГА- реакция торможения непрямой гемагглютинации
СТ - сыпной тиф
СЭСД - сухой сыпнотифозный эритроцитарный диагностикум ФТЭБ - формалинизированные танизированные эритроциты барана
ХСВ - химическая сыпнотифозная вакцина ЭД - эритроцитарный диагностикум

ноглобулиновым эритроцитарным диагностикумом (ИЭД) для выявления риккетеий группы сыпного тифа в микроварианте в соответствии с инструкцией.
Специфичность положительных результатов РНГА проверяли в реакции торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА) [59].
2.2.3. Непрямой метод Флуоресцирующих антител (нМФА).
Для выявления и титрования антигенов и антител к ним в сыворотках крови людей и экспериментальных животных использовали нМФА [16,24,25] в модификации нашей лаборатории [14].
Мазки готовили из коммерческих или экспериментальных корпускулярных антигенов R.prowazekii и R. typhi. Затем готовили последовательные двукратные разведения исследуемой сыворотки на забуферен-ном физиологическом растворе (pH 7,4) и наносили на мазки по капле каждого разведения, начиная с максимального. Выявление образовавшегося комплекса антиген-антитело проводили с помощью флуоресцирующих Fab-фрагментов антивидовых иммуноглобулинов (против иммуноглобулинов человека и кролика).
Учет результатов вели визуально на основе оценки интенсивности специфического свечения риккетеий.
За титр исследуемой сыворотки принимали ее максимальное раз-ведение, при котором наблюдали специфическое свечение риккетеий не ниже, чем на три креста.
Физико-химические и иммунохимические методы.
2.2.4. Выделение глобулиновых фракций из иммунных сывороток.
Выделение глобулиновых фракций из реиммунных сывороток к
R.prowazekii и R.typhi проводили путем двухкратного высаливания сернокислым аммонием при 34%-ном насыщении и pH 7,1 с последующим освобождением ее от солей на колонке с сефадексом G-50.