Биоразнообразие и таксономия аэробных метилобактерий

• Автор: Доронина, Нина Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 170 с. : ил.

Актуальность темы
Состояние вопроса, цель и задачи исследований
Научная новизна
Практическая значимость работы
Апробация работы
Публикации
Глава I. Объекты и методы исследования
1.1. Объекты исследования
1.2. Среды для культивирования
1.3. Выделение, поддержание и консервация метилотрофных бактерий
1.4. Морфология, культуральные и физиолого-биохимические свойства
1.5. Хемотаксономическая характеристика
1.6. Короткие экспозиции
1.7. Уровни ассимиляции углекислоты
1.8. Идентификация органических осмолитов
1.9. Выделение и очистка препаратов ДНК
1.10. Определение нуклеотидного состава ДНК по температуре плавления
1.11. ДНК-ДНК гибридизация
1.12. Биотест на цитокинины и иммуноферментный анализ
1.13. Скрининг генов метаболизма цитокининов
1.14. Амплификация и секвенирование гена 16S рРНК
1.15. Получение экстрактов клеток и определение активности ферментов
1.16. Полярографические измерения
1.17. Состав биомассы метилобактерий
1.18. Другие определения
1.19. Точность и воспроизводимость измерений
Глава II. Выделение, поддержание и хранение чистых культур
Глава III. Распространение аэробных метилобактерий, их
таксономическое и метаболическое разнообразие
3.1. Метилобактерии, использующие метанол
3.2. Пути окисления метанола
3.3. Метилобактерии, использующие метилированные амины
3.4. Пути окисления метилированных аминов
3.5. Аэробные деструкторы хлорметана
3.6. Аэробные деструкторы дихлорметана
3.7. Метилобактерии, использующие метилацетат
3.8. Окисление формальдегида
3.9. Окисление формиата
3.10. Пути ассимиляции Ci-соединений
3.11. Галофильные метилобактерии
3.12. Особенности метаболизма галофильных метилобактерий
3.13. Механизмы галоадаптации
3.14. Новые данные о способности аэробных метилотрофных бактерий синтезировать цитокинины
Глава IV. Таксономия метилобактерий
4.1. Схема идентификации метилобактерий
4.2. Метилобактерии с рибулозомонофосфатным путем
4.3. Метилобактерии с сериновым путем
4.4. Метилобактерии с рибулозобисфосфатным путем
4.5. Филогенетическое положение новых метилотрофных изолятов
4.6. Краткое описание новых родов метилобактерий
4.7. Атлас новых метилотрофных изолятов
Глава V. Аэробные метилобактерии как объекты биотехнологии
5.1. Биосинтез различных продуктов на основе Срсубстратов
5.2. Ферменты
5.3. Биодеградация токсичных соединений
Заключение
Выводы
Литература

Глава II. Выделение, поддержание и хранение чистых культур.
Из первичных накопительных культур в жидких минеральных средах с С1-субстратами выделялось до пяти видов аэробных метилотрофных бактерий, тогда как из многократно пассированных накопительных культур - не более двух.
Поскольку изолировать чистые культуры метилобактерий из большинства галофильных и алкалофильных сообществ традиционными методами не удавалось, использовали селекцию по скорости роста микроорганизмов, фильтрацию через мембранные фильтры, ультрацентрифугирование и культивирование на агаре с автолизатом клеток сообщества.
Всего в чистые культуры выделено 350 штаммов метилотрофных бактерий. При наличии обширной коллекции, в которую затем было добавлено около 100 штаммов, полученных от зарубежных коллег и 100 штаммов метанотрофов (от В.Ф. Гальченко), возникла необходимость разработки простых и надежных способов их хранения.
Обычным способом поддержания метило- и метанотрофных бактерий стал их регулярный пересев на твердых и жидких питательных средах, что было сопряжено с риском загрязнения культур посторонней микрофлорой и могло приводить к значительным изменениям их исходных свойств. Ряд облигатных и ограниченнофакультативных метилотрофных штаммов требовали еженедельного пересева, несколько культур не росли на твердых питательных средах.
Большинство метилобактерий и метанотрофов пересевали на агаризованных средах ежемесячно, причем для метанотрофов использовали в пробирках колпачки со стекловатой вместо ватных пробок (Гальченко с соавт., 1986).