Протеолитические ферменты в тканях некоторых морских беспозвоночных

• Автор: Мухин, Вячеслав Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Мурманск
• Количество страниц: 160 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Общая характеристика протеолиза и протеолитических ферментов
2. Роль протеиназ в белковом метаболизме гидробионтов
2.1. Аспартильные протеиназы (катепсин О, пепсин, катепсин Е)
2.2. Сериновые протеиназы (эластаза, трипсин, коллагенолитические протеиназы, химотрипсин)
2.3. Са2+ - активируемые нейтральные протеиназы
3. Посмертные изменения белков в тканях гидробионтов
4. Роль протеиназ в физиолого-биохимических адаптациях морских беспозвоночных
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
1. Материал
1.1. Краткая характеристика исследуемых объектов
1.1.1.Исландский гребешок
1.1.2. Морской еж
1.1.3. Камчатский краб, акклиматизированный в Баренцевом море
1.2. Методика отбора, хранения и обработки биологических проб
2. Методы исследований
2.1. Определение стадий зрелости исследуемых организмов
2.2. Приготовление гомогенатов тканей и экстракция протеиназ
2.3. Определение активности протеиназ
2.4. Определение концентрации белка в пробах
2.5. Схема выделения и очистки исследуемых протеиназ

2.5.1. Методы группового осаждения белков
2.5.2. Разделение белков из тканей исследуемых объектов методом гель-фильтрации на колонках с сефадексом 0-100 и с ультрогелем АсА
2.5.3. Определение молекулярной массы исследуемых белков методом гель-фильтрации
2.5.4. Оценка степени белкового автолиза тканей при различных режимах и сроках хранения сырья
2.5.5. Ионообменная хроматография на колонках с ДЭАЭ-целлюлозой
2.5.6. Диск-электрофорез в ПААГ
2.6. Статистическая обработка данных
ГЛАВА III. СПЕКТР И ТКАНЕВАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ ПРОТЕИНАЗ МОРСКИХ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ.
1. Пищеварительные органы
2. Половые органы
3. Мышечные ткани
ГЛАВА IV. ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ В ПРОЦЕССЕ ГОДОВЫХ ЦИКЛОВ МОРСКИХ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ.
1. Динамика активности внутриклеточных протеолитических ферментов в гонадах морского ежа в процессе созревания половых продуктов
1.1. Активность катепсина И, эластазы и акрозина
1.2. Активность кальпаиноподобных ферментов
2. Динамика общей протеолитической активности в гонадах гребешка в процессе годового цикла развития

ГЛАВА У. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ И ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕИНАЗ В ПРОЦЕССЕ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМОВ И СРОКОВ ХРАНЕНИЯ СЫРЬЯ.
1. Камчатский краб
ТЕ Изменения фракционного состава белков
1.2. Изменение протеолитической активности
2. Исландский гребешок
2.1. Изменения фракционного состава белков
ГЛАВА VI. ЧАСТИЧНАЯ ОЧИСТКА И НЕКОТОРЫЕ СВОЙСТВА ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ ИЗ ТКАНЕЙ МОРСКИХ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ.
1. Катепсин D
1.1. Катепсин D из гепатопанкреаса камчатского краба
1.2. Катепсин D из гонад исландского гребешка
2. Комплексные препараты протеолитических ферментов
2.1. Комплекс кислых протеиназ из гонад исландского гребешка
2.2. Комплекс протеолитических ферментов из гепатопанкреаса камчатского краба
3. Сравнительная характеристика полученных препаратов протеолитических ферментов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЯ

соединительной коллагенсодержащей ткани. Бауэр с сотрудниками (Bauer, Eisen, Jeffrey, 1970 (цит. по Дингл, 1980)) изучили коллагеназу кожи человека и крысы, Верб и Рейнолдс (Werb, Reynolds, 1975 (цит. по Дингл, 1980)) исследовали коллагеназу кроликов. Вулли с сотрудниками (Woolley, Crossley, Evanson, 1976 (цит. по Дингл, 1980)), провел сравнительное иммунологическое исследование коллагеназ из различных тканей одного и того же вида животных и сделали вывод об их сходстве. Аналогичные исследования, проведенные на коллагеназах из различных животных обнаруживают иммунохимическое сродство между коллагеназами из роговицы кролика, десен собаки и синовиальной жидкости человека (Woolley, Crossley, Evanson, 1976 (цит. по Дингл, 1980)). В водных организмах колл arc н оли т иче ская металлопротеиназа была обнаружена, в мышечной ткани некоторых видов морских окуней Sebastes species (Bracho, EIaard, 1991). Молекулярные свойства сериновых коллагеназ близки к таковым трипсина и химотрипсина. По данным Еальгани и Нагайама (Galgani, Nagayama, 1988), коллагеназа и трипсин из пищеварительной железы японского омара имеют одинаковую молекулярную массу - 24 кД и оптимум pH - 7.5 . При этом химотрипсиновая активность в экстрактах пищеварительной железы не была обнаружена. У четырех видов креветок рода Penaeus были, напротив, обнаружены и изучены два типа химотрипсиноподобных ферментов с коллагенолитической активностью (Wormlioudt, Chevalier, Sellos, 1992; Tsai, Lu, Chuang, 1991). Определены изоэлектрические точки и молекулярные массы этих ферментов: 3.2 и 3.0, 27 кД и 25 кД - соответственно. Расшифрована аминокислотная последовательность одной из протеиназ, которая существует в виде препроэнзима (270 аминокислотных остатков). Профермент образуется с отщеплением 14 аминокислотных остатков, а активная форма состоит из 226 аминокислот (Wormhoudt, Chevalier, Sellos, 1992). Авторы отмечают, что аминокислотная последовательность этого фермента гомологична коллагеназе краба Uca pugilator и другим химотрипсинам. Коллагенолитический фермент из мышц морских окуней