Создание функционально активного минимального белкового фрагмента аполипопротеина E

• Автор: Лохов, Петр Генриевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Общие сведения об апо Е
2.1.1. Открытие апо Е
2.1.2. Синтез апо Е
2.1.3. Полиморфизм апо Е
2.1.4. Рецепторы, взаимодействующие с апо Е
2.1.4.1. Апо Е-рецеягор
2.1.4. 2. Апо В,Е-рецептор
2 .1. 4 . 3. Рецептор ЛИОНЕ
2.1.4. 4. Скэвэнджер-рецептор
2.1.5. Функции апо Е
2.1.6. Роль апо Е в нарушениях липидного обмена
2.1.7. Структура апо Е
2.2. Рецепторсвязывающий домен апо Е
2.3. Пептиды апо Е
2.4. Существующие аналоги аполипопротеина
2.5. Амфипатические пептиды
2.6. Заключение по обзору литературы
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Материалы
3.2. Оборудование
3.3. Методы
3.3.1. Множественное выравнивание аминокислотных последовательностей
3.3.2. Расчет гидрофобности пептида
3.3.3. Модель взаимодействия пептида с липидным
слоем
3.3.3.1. Модель фосфолипида
3.3.3.2. Модель фосфолипидного моыослоя
3.3. 3.3. Модель пептида
3.3.3.4. Опытная и контрольная микросистемы
3.3. 3.5. Молекулярная динамика
3.3.3.6. Константа ассоциации пептида с липидным слоем
3.3.4. Синтез пептида
3.3.5. Очистка пептида
3.3.6. Анализ аминокислотной последовательности пептида
3.3.7. Ацилирование пептида
3.3.8. Аминокислотный анализ ацилированного пептида
3.3.9. Выделение липопротеидов низкой плотности
3.3.10. Приготовление мицелл
3.3.11. Приготовление липосом
3.3.12. Культура клеток
3.3.13. Выделение гепатоцитов
3.3.14. Взаимодействие пептида с апо В,Е-рецепто-ром клеток РС12
3.3.15. Влияние пептида на взаимодействие мицелл
с гепатоцитами
3.3.16. Адресная доставка пептидом липосом in vivo
3.3.17. Влияние пептида содержание общего холестерина, холестерина ЛПВП и апо В в сыворотке крови..59 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

4.1. Поиск аминокислотной последовательности, пригодной для создания аполипопептида
4.2. Оценка гидрофобносги пептида
4.3. Результаты молекулярного моделирования
4.4. Анализ структуры синтезированного пептида
4.5. Хроматография и аминокислотный анализ ацилированного пептида
4.6. Влияние пептида на взаимодействие липосом с апо
В,Е-рецептором клеток
4.7. Действие пептида на поглощение мицелл тепатоцита-ми
4.8. Влияние пептида на поглощение тканями крысы инкапсулированного в лилосомы доксорубицина
4.9. Изменение уровня липопротеидов и холестерина сыворотки крови при в/в инъекции пептида
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. ПРИЛОЖЕНИЕ

апо Е дефицитных мышей, Внутривенное введение пептида снижало на 30% содержания общего холестерина плазмы, что отражало снижение ЛПОНП на 40-50%и ЛПШ1 на 20-26%. Таким образом, можно говорить о существовании аналога апо Е, являющимся крупным пептидом (30 аминокислот), при создании которого основывались на данных о мультилигаыдном взаимодействии апо Е с рецептором.
2.5. Амфипатические пептида
Связывание пептидов с липидными частицами без их погружения в гидрофобную часть ФЛ может осуществляться амфипа-тическими пептидами. Последние при формировании вторичной структуры в форме а-спирали имеют на одной стороне, преимущественно, заряженные боковые радикалы аминокислот, в то время как на другой, гидрофобные боковые радикалы аминокислот. Неполярная сторона а-спирали пептида проникает в липидный слой, а заряженная сторона взаимодействует с водной фазой. Эта теория была подтверждена результатами многих исследований. В частности это было показано на нескольких, связывающихся с липидными частицами, модельных пептидах и фрагментах нативных алопротеинов, ответственных за связывание с липидами (Sparrow T.J. et al., 197 3; Sigler G.F. et al
1976; Mao S.J. et al., 1977; Chen T.C. et al., 1979;
Fukushima A. et al., 1980; Kanellis P. et al*, 1980; Pownall
H.J. et al., 1980). Проведенные исследования позволили
сформулировать несколько свойств нативных и синтетических, ассоциирующихся с липидными частицами полипептидов (Ponsin
G., 1984):
- полипептиды должны иметь потенциал к формированию а-спирали в присутствии липидного слоя, хотя а-спиральная структура в