Исследование комплекса белковых ингибиторов протеолитических ферментов тканей и органов тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития

• Автор: Тарасенко, Наталия Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с. : ил.

1.2. Механизм действия белковых ингибиторов сериновых протеиназ

1.3. Структура белковых ингибиторов сериновых протеиназ

1.4. Регуляция активности ингибиторов сериновых протеиназ

1.5. Классификация белковых ингибиторов протеиназ

1.6. Белковые ингибиторы протеиназ насекомых

1.7. Белковые ингибиторы протеиназ тутового шелкопряда

1.8. Физиологические функции белковых ингибиторов насекомых.

1.9. Сравнение белковых ингибиторов протеиназ насекомых с ингибиторами других животных

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

.1. Материал

.2. Получение белковых экстрактов тканей и органов тутового шелкопряда

Н.З. Определение эндогенной протеолитической
активности
.4. Определение подклассовой принадлежности протеолитических ферментов
.5. Определение активности эндогенных ингибиторов
протеолитических ферментов
спектрофотометрическим методом.
Определение термостабильности белковых ингибиторов протеиназ в гомогенате шелкоотделительной железы.
Определение изоэлектрических точек белков методом изоэлектрофокусирования в слое ультродекса.
Фракционирование белков методом
аналитического иэоэлектрофокусирования в тонком слое полиакриламидного геля Определение спектра белковых ингибиторов трипсина с использованием фотоматериалов метод желатиновых реплик Конарева.
Методы выделения и очистки ингибиторов трипсина.
Гельфильтрация.
Концентрирование образцов.
Высокоэффективная жидкостная хроматография НР1С.
Определение молекулярной массы ингибиторов трипсина из серицинового отдела шелкоотделительной железы методом гельфильтрации.
Статистическая обработка результатов эксперимента
Исследование эндогенного протеолитического комплекса в тканях и органах тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития
Гетерогенность эндогенного протеолитического
комплекса в функционально связанных органах и тканях тутового шелкопряда. Динамика активности отдельных фракций пептидогидролаз в тканях и органах тутового шелкопряда на заключительном этапе личиночного развития.
Активность эндогенного комплекса
пептидогидролаз в тканях и органах тутового шелкопряда в связи с процессами шелкообразования
Комплекс белковых ингибиторов сериновых
протеиназ в тканях и органах тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития.
Активность белковых ингибиторов трипсина и
химотрипсина в тканях и органах тутового шелкопряда.
Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов
трипсина в шелкоотделительной железе тутового шелкопряда.
Определение изоэлектрических точек белковых
ингибиторов трипсина шелкоотделительной железы.
Определение термостабильности белковых
ингибиторов трипсина шелкоотделительной железы.
Гетерогенность комплекса белковых ингибиторов
трипсина из серицинового отдела шелкоотделительной железы по величине молекулярных масс.
IV. 2.5. Глава V. V.
М.З
V.4. Глава VI.


Определение специфичности частично очищенного ингибитора трипсина из серицинового отдела шелкоотделительной железы.
Разделение фракций ингибиторов трипсина, полученных методом гельфильтрации, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографией на Т8КОЕАЕ5РЛ.
Выявление возможной протеиназымишени для эндогенных белковых ингибиторов трипсина в серициновом отделе шелкоотделительной железы.
Сопоставление динамики активности эндогенного комплекса белковых ингибиторов трипсина с
активностью протеиназ с оптимумами рН8,6 и 9,9 на заключительном этапе личиночного развития тутового шелкопряда.
Определение подклассовой принадлежности протеиназ с оптимумами действия 8,6 и 9,9. Сравнение оптимумов щелочной протеиназы и белковых ингибиторов трипсина из серицинового отдела шелкоотделительной железы.
Определение молекулярной массы сериновой протеиназы из серицинового отдела с оптимумом 9,9.
Активность белковых ингибиторов трипсина у
различных по продуктивности пород тутового
шелкопряда
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
ВВЕДЕНИЕ


Выявить гетерогенность комплекса белковых ингибиторов протеиназ в шелкоотделительной железе по ряду параметров значения изоточек, пределы термостабильности, величины молекулярных масс осуществить частичную очистку ингибиторов трипсина из серицинового отдела шелкоотделительной железы. Исходя из сопоставления динамики изменения активности пептидогидролаз и активности блокирующих их ингибиторов в процессе развития тутового шелкопряда, сравнения оптимумов действия тех и других, а также ряда других данных обсудить вероятность присутствия эндогенной протеиназымишени, специфической для одного из белковых ингибиторов трипсина. Изучить взаимосвязь между активностью ингибиторов трипсина, присущих шелкоотделительной железе, и активностью протеолитических ферментов из этого органа тутового шелкопряда с некоторыми хозяйственно полезными показателями некоторых его пород. Научная новизна работы. В динамическом единстве изучены процессы протеолиза и их регуляция при посредстве белковых ингибиторов сериновых протеиназ в тканях и органах тутового шелкопряда на заключительном этапе его личиночного развития. Выявлена тканевая и фазовая специфичность пептидогидролаз. Изучена судьба отдельных пептидогидролаз в исследуемый период онтогенеза тутового шелкопряда. Исследован комплекс белковых ингибиторов сериновых протеиназ трипсина и химотрипсина и проанализирована его тканевая специфичность у тутового шелкопряда на заключительном этапе личиночного развития. Впервые обнаружен комплекс белковых ингибиторов трипсина в фиброиновом и серициновом отделах шелкоотделительной железы тутового шелкопряда, и изучена его гетерогенность по ряду физикохимических параметров Мг величина р1 и пределы термостабильности. Определена возможная эндогенная протеиназамишень ингибиторов трипсина, функционирующих в шелкоотделительной железе тутового шелкопряда. Исследована динамика изменений активности комплекса белковых ингибиторов трипсина в гемолимфе, фиброиновом и серициновом отделах шелкоотделительной железы, интегументе и жировом теле на протяжении 5го личиночного возраста и периода завивки кокона. Сопоставление динамики активности белковых ингибиторов трипсина и активности эндогенных протеиназ с оптимумами 8,6 и 9,9 в тканях и органах тутового шелкопряда в процессе его развития позволили конкретизировать представление о предполагаемых функциях белковых ингибиторов трипсина у тутового шелкопряда. Практическое значение работы. Получены данные о решающей роли пептидогидролаз в процессах использования белков тканей личинки для построения белков шелка и механизмах переключения отдельных этапов программы азотистого обмена в тканях и органах тутового шелкопряда. Установлена роль каждой из исследованных тканей и отдельных энзимов протеолитического комплекса в мобилизации белков тканей для биосинтеза белков шелка. Диссертационная работа изложена на 1 странице машинописного текста, содержит таблиц, рисунков. Список цитируемой литературы включает 1 название, из которых Шбна иностранных языках. Н3,4. Изучена взаимосвязь между активностью белковых ингибиторов трипсина, активностью щелочной протеиназы хроматина шелкоотделительной железы и уровнем продуктивности шести пород тутового шелкопряда, в результате чего и обнаружена обратная зависимость между учтенными показателями. Высказано предположение, что в пуле ингибиторов трипсина есть белки, регулирующие активность протеиназы хроматина шелкоотделительной железы с оптимумом рН9,0, что сказывается на процессах регуляции шелкообразования, восходящих, повидимому, к функционированию генома насекомого. Результаты, полученные в процессе изучения протеолитического комплекса ферментов и их белковых ингибиторов у одного из представителей класса насекомых важны в сравнительнобиохимическом аспекте для более глубокого понимания сущности протеолиза и механизмов его регуляции у живых организмов. Апробация работы Основные результаты диссертации доложены на научных сессиях по итогам научноисследовательской работы Московского Педагогического Государственного Университета в и году. По материалам диссертации опубликовано 5 статей и тезисы сообщений на V Европейском энтомологическом конгрессе в Йорке год и XX Международном энтомологическом конгрессе во Флоренции год.