+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Регуляция экспрессии изоцитратлиазы у организмов различных таксономических групп

  • Автор:

    Шевченко, Максим Юрьевич

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2004

  • Место защиты:

    Воронеж

  • Количество страниц:

    200 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

ВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Биохимические аспекты процессов, ведущих к интенсификации глюконеогенеза
1.2. Особенности обмена жирных кислот и гликогена у позвоночных животных
1.2.1. Биохимические сведения о трансформации жирных кислот в углеводы
1.2.2. Роль и регуляция активности глюконеогенетических ферментов при голодании
1.3. Роль глюконеогенеза в онтогенезе некоторых видов беспозвоночных.
1.4. Глиоксилатный цикл как промежуточный этап глюконеогенеза
1.4.1. Распространение глиоксилатного цикла у грибов, бактерий и низших водорослей
1.4.2. Глиоксилатный цикл высших растений
1.4.3. Глиоксилатный цикл в тканях животных
1.4.4. Индукция глиоксилатного цикла в патогенах
1.5. Характеристика ключевых ферментов глиоксилатного цикла
1.5.1. Физико-химические свойства ИЦЛ
1.5.2. Кинетические и регуляторные характеристики ИЦЛ
1.5.3. Характеристика структуры гена и пространственной организации изоцитратлиазы и малатсинтазы
1.6. Эволюция ферментов глиоксилатного цикла
1.7. Экспрессия и регуляция работы глиоксилатного цикла
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Цель и задачи
2.2. Объекты и методы исследования
2.2.1. Объекты исследования
2.2.2. Методы исследования
2.2.2.І. Создание условий пищевой депривации для крыс Rattus Rattus L
22.2.2. Выращивание бабочки P.machaon L
2.2.2.3. Выращивание культур бактериальных клеток
2.2.2.4. Получение экстрактов различных тканей
2.2.2.5. Дифференциальное центрифугирование
2.22.6. Определение активности ферментов
2.2.2.7. Определение концентрации метаболитов углеводного обмена
2.2.2.8. Определение количества белка
2.2.2.9. Выделение и очистка ферментов
2.2.2.10. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония
2.2.2.11. Гель-фильтрация и ионообменная хроматография
2.2.2.12. Определение молекулярной массы нативного фермента
2.2.2.13. Электрофоретические исследования
2.2.2.14. Определение массы субъединиц фермента
2.2.2.15. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности ферментов
2.2.2.16. Экстракция суммарной РНК
2.2.2.17. Выделение ДНК
2.2.2.18. Проведение обратной транскрипции мРНК и полимеразной
цепной реакции (ОТ-ПЦР)
2.2.2.19. Проведение Саузерн-дот-блоттинга
2.2.2.20. Определение количества РНК и ДНК
2.2.2.21. Анализ аминокислотных и нуклеотидных последовательностей
2.2.2.22. Аналитический электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном
геле
2.2.2.23. Препаративный электрофорез ПЦР-продукта в агарозном геле
2.2.2.24. Эктракция ДНК из агарозного геля
2.2.2.25. Клонирование ампликона в прокариотической системе
2.2.2.26. Выделение плазмидной ДНК из Escherichia colL
2.2.2.27. Секвенирование ДНК
2.2.2.28. Статистическая обработка данных
2.3. Полученные результаты и их обсуждение
2.3.1. Динамика содержания основных субстратов и метаболитов в ходе онтогенеза у бабочки Р.таскаоп и печени контрольных и голодающих крыс
2.3.1.1. Изменение концентрации некоторых метаболитов у бабочки махаона
2.3.1.2. Изменение концентрации некоторых метаболитов в печени контрольных и голодающих крыс
2.3.2. Динамика активности ферментов углеводного метаболизма в ходе онтогенеза у бабочки Р.таскаоп и у крыс при пищевой депривации
2.3.2.1. Динамика активности ФЕПКК в ходе онтогенеза бабочки махаона и в печени и почках голодающих крыс
2.3.2.2. Сравнение активностей ИЦЛ у организмов различных
таксономических групп
2.3.3. Очистка ИЦЛ из куколок махаона и печени голодающих крыс
2.3.3.1. Очистка ИЦЛ из куколок бабочки Р.таскаоп
2.3.3.2. Очистка ИЦЛ из печени голодающих крыс
2.3.3.3. Очистка ФЕПКК из печени голодающих крыс
2.3.3.4. Изучение кинетических, физико-химических и регуляторных характеристик ИЦЛ из куколок бабочки Р.таскаоп
2.3.3.5. Изучение кинетических, физико-химических и регуляторных характеристик ИЦЛ из печени голодающих крыс
2.3.3.6. Сравнение свойств ИЦЛ из бабочки махаона и печени крыс
2.3.4. Характеристика экспрессии ИЦЛ в куколках бабочки махаона и в печени голодающих крыс
2.3.4.1. Анализ нуклеотидных последовательностей и разработка праймеров для идентификации гена изоцитратлиазы и малатсинтазы
2.3.4.2. Оптимизация условий и проведение ПЦР для обнаружения генов

высших растений (Землянухин и др., 1986), нематод (Shahid et al., 1985), клещей (Kamel et al., 1982) и крыс (Попов и др., 1996).
Так, из нематоды Caenorhabditis elegans была очищена изоцитратлиаза по следующей схеме: высаливание (NH4) 2SO4 (33-55%), хроматография на Сефарозе 6В и диэтиламиноэтил-целлюлозе. Был получен гомогенный фермент с выходом 4% и удельной активностью 2 Е/мг белка. Потерю активности ИЦЛ авторы связывают со стадией высаливания (Shahid et al., 1985). Очистка ИЦЛ из других объектов, как правило, включала фракционирование сульфатом аммония, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе и гель-фильтрацию на различных сефадексах. В некоторых случаях было успешно проведено фракционирование протаминсульфатом, и спиртом с последующей ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе ИЦЛ из эндосперма клещевины (Vinccenzini et al., 1986). Также описана очистка (включающая фракционирование ацетоном, диализ, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе и сефадексе G-200) ИЦЛ из развивающихся эмбрионов клещей Hyalomma dromedarii (Kamel et al., 1982).
Молекулярная масса ИЦЛ и субъединичное строение. Изоцитратлиаза из различных объектов, как правило, имеет чётное число субъединиц с молекулярной массой 60±8кДа. Так, ИЦЛ, полученная из нематод, имеет Мг 250 кДа и состоит из 4 субъединиц по 61кДа. Кроме того, из нематод выделена также поли (А+)-РНК. Продуктами ее трансляции в бесклеточной системе зародышей пшеницы являются полипептиды с Мг 60-65кДа (Liu et al., 1995). Очищенный гомогенный фермент с молекулярным весом 250 кДа и Мг субъединицы 61,6 кДа был получен из нематоды Caenorhabditis elegans (Jameel etal., 1985).
Значение Мг ИЦЛ семян Lupinus, определенной методом гель-фильтрации на сефарозе CL6B составило 260 кДа. Причём нативная ИЦЛ является тетрамером, состоящим из субъединиц с Мг ббкДа (Vinccenzini et al., 1986).

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.129, запросов: 967