Клонирование и характеристика семейства генов рибосомного белка S21 и фактора дифференцировки HLDF человека

• Автор: Смирнова, Евгения Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
ВВЕДЕНИЕ
1. ГЕНЫ РИБОСОМНЫХ БЕЛКОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ИХ РЕГУЛЯЦИЯ НА УРОВНЕ ТРАНСКРИПЦИИ (обзор литературы)
1.1. Рибосомные белки и их экспрессия в клетках млекопитающих
1.2. Семейства генов рибосомных белков
1.3. Характерные особенности активных интрон-содержащих рб-генов млекопитающих
1.3.1. Структурные особенности и расположение на хромосомах
1.3.2.Ассоциация с Срв островками
1.3.3.Ассоциация с Л/«-последовательностями и последовательностями
гетерогенных РНК
1.4. Отдельные предсталители семейства рб-генов млекопитающих и особенности регуляции их транскрипции
1.4.1. грЬЗО, грЬ32 и грБ16

1.4.3. грЬ 7а

1.4.6. грБ14,
1.4.7. грБ24

1.4.9. грЬ23а
1.5. Дополнительные функции рибосомных белков и динамика их экспрессии в клеточных процессах
1.5.1. Внерибосомные функции рибосомных белков
1.5.2. Изменения экспрессии рибосомных белков при пролиферации, дифференцировке и злокачественном перерождении клеток
2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
2.1. Введение
2.2. Клонирование и установление нуклеотидной последовательности гена рибосомного белка ЛР821 человека

2.2.1. Клонирование и установление нуклеотидной последовательности внутренних областей гена грБ21
2.2.2. Поиск 5’ и 3’ областей гена грБ21
2.2.3. Определение точки инициации транскрипции_гена грБ21
2.2.4. Экзон-интронная организация гена рибосомного белка человека гр821
2.2.5. Анализ 5’-регуляторной области гена грБ21
2.2.6. Сравнение нуклеотидной последовательности гена грБ21 с генами известных рибосомных белков млекопитающих
2.2.7. Клонирование и определелие нуклеотидной последовательности псевдогена psrpS21 из семейства генов рибосомного белка человека КР821
2.3. Гипотеза возникновения НЫЖ на базе геномной последовательности гена рибосомного белка человека
2.4. Клеточная локализация НЕБЬ и ЫР821
2.4.1. Выделение мРНК и синтез первой цепи кДНК
2.4.2. Получение экспрессирующих конструкций, содержащих кДНК рибосомного белка 11Р821
2.4.3. Экспрессия ЫР821 в клетках Е. соН, идентификация и выделение рекомбинантного продукта
2.4.4. Получение и очистка С-коцевого фрагмента 11Р821
2.4.5. Получение поликлональных антител к полноразмерному рибосомному белку 11Р821, его С-концевой области и фактору дифференцировки Н1Л)Е человека
2.4.6. Иммуногистохимическое окрашивание клеток НГ
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Материалы
3.1.1. Реактивы
3.1.2. Ферменты
3.1.3. Штаммы и плазмидные векторы
3.1.4. Микробиологические среды и буферы
3.1.5. Другие растворы
3.1.6. Фотографические растворы
3.2. Методы
3.2.1. Амплификация фрагментов ДНК (ПЦР)
3.2.2. Аналитический электрофорез в агарозном геле

3.2.3. Выделение ДНК из агарозы
3.2.4. Обработка продуктов ПЦР полинуклеотидкиназой и ДНК-полимеразой I фага Т4
3.2.5. Реакция лигирования
3.2.6. Получение компетентных клеток E.coli
3.2.7. Трансформация компетентных клеток
3.2.8. Отбор рекомбинантных клонов с помощью ПЦР
3.2.9. Препаративная рестрикция
3.2.10. Реакция дефосфорилирования
3.2.11. Выделение плазмидной ДНК из клеток E.coli
3.2.12. Подготовка образцов для проведения оПЦР
3.2.13. Определение нуклеотидных последовательностей по методу Сэнгера
3.2.14. Выделение ДНК фага к (X Fix П)в микроварианте
3.2.15. Выделение ДНК фага к в макроварианте
3.2.15. Перенос и иммобилизация ДНК фага на фильтрах
3.2.16. Лизис колоний E.coli на нитроцеллюлозных фильтрах
3.2.17. Гибридизация лизированных колоний с радиоактивномечеными зондами
3.2.18. Определение точки инициации транскрипции)
3.2.19. Электрофорез белков
3.2.20. Электроблотинг белков
3.2.21. Иммуноокрашивание
3.2.22. Определение N-концевых аминокислотных последовательностей
3.2.23. Выделение тотальной РНК из клеток линии HL
3.2.24. Синтез первой цепи кДНК
3.2.25. Экспрессия кДНК рибосомного белка RPS21 в клетках E
3.2.26. Очистка рекомбинантного белка
3.2.27. Бромциановый гидролиз RPS21
3.2.28. Получение коныогата для иммунизации животных
3.2.29. Получение поликлональных антител
3.2.30. Очистка поликлональных антител
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ