Возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния "окислительного стресса" в клинической практике

• Автор: Фролова, Милена Юрьевна
• Шифр специальности: 14.00.46
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 148 с. : ил

1.1. Активные формы кислорода и их влияние на структуру

и функцию белка

1.2. Влияние аминокислотного состава на чувствительность белка

к окислению

1.3. Свободнорадикальное окисление и нативная структура белка

1.4. Окисление белков, катализируемое металлами

1.5. Ускоренная деградация молекул белка как следствие окислительной денатурации

1.6. Взаимодействие белков с продуктами перекисного окисления липидов

1.7. Неэнзиматическое гликозилирование белков

1.8. Оценка степени окисления белков в интактных клетках

и модельных системах.

1.9. Роль окислительной модификации в регуляции оборота белков
1 Окислительная модификация белков как показатель степени
оксидативного стресса
1 Влияние АФК на функциональную активность белков плазмы
крови
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Характеристика обследованных больных
2.2. Характеристика методов исследования.
2.2.7. Исследование окислительной модификации белка
в модельных системах.
2.2.2. Методы анализа активных форм кислорода и продуктов окислительной деградации макромолекул
2.2.3. Методы исследования антиоксидантной системы.
2.2.4. Статистические методы
2.2.5. Характеристика используемых реактивов и оборудования
Глава 3. Данные модельных опытов и методические аспекты определения карбонильных групп белков сыворотки крови.
3.1. Изучение окислительной модификации белков в модельных
опытах
3.1.1. Дифференциальные спектры динитрофенилгидразонов белков при их окислении в химических системах, генерирующих активные формы кислорода.
3.1.2. Тушение триптофановой флуоресценции и образование битирозина
3.2. Методические аспекты определения карбонильных групп
белков сыворотки крови.
3.2.1. Выявление аналитической надежности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови.
3.2.2. Определение карбонильных групп во фракциях белков сыворотки крови.
Глава 4. Карбонильные группы белков сыворотки крови в оценке
окислительного стресса у пациентов с рассеяным склерозом.
Глава 5. Карбонильные группы белков в оценке окислительного стресса
при макулодистофии
Глава 6. Карбонильные группы белков сыворотки крови и оценка окислительного стресса у пациентов с сердечнососудистой
патологией.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Многие аминокислоты превращаются при окислении в карбонилпроизводные, например, аргинин и пролин в глутамилсемиальдегидные остатки, лизин в а аминоадипилсемиальдегид, треонин в 2аминоЗбутиловую кислоту. В опытах с использованием урадиации, вызывающей разложение Н и формирование ОН, и Н2, также были получены результаты, свиде
Туг
тельствующие о различной способности свободных аминокислот к окислению АФК ii . Это позволило исследователям разделить аминокислоты на три группы те, что дают незначительное число окисленных продуктов, аминокислоты, дающие высокий выход и промежуточная группа. В первую группу входят , , , , Туг, Су и . V, , Тгр , , I , и относятся ко второй группе. Опыты с ди и трипептидами показали, что способность к окислению АФК, генерируемых при у радиации, у пептидов повышается в случае присутствия в них аминокислот с повышенной чувствительностью к действию свободных радикалов. В основу этих исследований было положено предположение о том, что результатом взаимодействия аминокислот с АФК является формирование гидроперекисей. Рг радикал, образующийся при отщеплении Н от углеродного атома бокового радикала аминокислоты, его продолжительности существования достаточно для осуществления 2й реакции. Донор в 3й реакции неизвестен, но существует предположение, что может отдавать радикал. Реакция 5 может осуществляться в результате отщепления Н от другой части молекулы белка радикалом РЮО. Проведенные исследования показали, что способность аминокислот к формированию стабильных и долгоживущих гидроперекисей зависит от наличия в боковой цепи третичного атома углерода V, I, или, по крайней мере, двух сопряженных СН2групп.