Клинико-диагностическое значение определение миелопероксидазы в моноцитах и нейтрофилах периферической крови больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системной склеродермией, болезн

• Автор: Рвачев, Алексей Владимирович
• Шифр специальности: 14.00.39
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Волгоград
• Количество страниц: 214 с.

ГЛАВА 1 МИЕЛОПЕРОКСИДАЗА ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА, РАСПРОСТРАНЕНИЕ В ПРИРОДЕ. ГЛАВА 6 ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ И МОНОЦИТАХ
На основании приведенных экспериментальных данных можно предположить механизм реакции, катализируемой МПО, и структуры се фсрмеитсубстратных комплексов. Различают четыре типа комплексов. Комплекс I образуется сразу при добавлении НСЬ это нестойкое соединение, которое обычно быстро превращается в комплекс I В . Комплексы III и IV представляют собой соединения, образующиеся при избытке Н2О2. Эти комплексы не обладают каталитической активностью, и их образование ведет к торможению реакции. Суммарный процесс можно представить уравнениями . В . I 7. Миелопероксидаза относительно устойчива к фиксации и, следовательно, может быть обнаружена в фиксированном материале. Фермент выдерживает длительную фиксацию в формальдегиде, а после тщательного промывания и заливку в парафин глутаральдегид также может использоваться в качестве фиксирующего агента для клеток транулоиитарного и мокоцитарного рядов ,, 0,2,9,6.


Однако наиболее часто используют 3,3диаминобензидиновую реакцию, введенную в практику гистохимии Карновским и Грэхемом 3, и впоследствии модифицированная Новиковым 6, поскольку продукт полимеризации ДАВ контрастируется особенно хорошо и образующийся осадок имеет четкие границы, не вступает во взаимодействие с заливочной средой и с растворами контрастирующих веществ . По сравнению с другими диамикобензидиновый метод дает возможность выявлять наибольшее количество пероксидаз, включая МПО в гранулах лейкоцитов и псеваопероксидазы, такие, как гемоглобин или миоглобин. Г в секретирующих клетках щитовидной и слюнных желез 8. Изменяя i. Н0 и характер предварительной обработки ткани, можно модифицировать метод так, что отдельные пероксилазы будут выявляться лучше, чем при выполнении оригинальной прописи Грзчсма и Карновското . Хираи предложил выявлять ПО и другие окислительные ферменты при помощи контрастирования окисленным лиамииобеизидином. Сродство ферментного белка к окисленному диаминобензиднну сохраняется даже после фиксации ткани в альдегиде, тогда как ферментативная активность при этом утрачивается. Очевидно, обусловленные фиксацией конформационные изменения ферментного белка не распространяются на активные центры молекулы, поскольку эффект ингибиторов или связывание окисленного диаминобензидина сохраняется даже в фиксированной ткани 1. Смешивание растворов анафтола и димегшгпфенилеидиамина i vi в присутствии О приводит к образованию красителя индофенолового синего его формирование может быть ускорено добавлением окисляющих агентов. Эту реакцию называют реакцией нади. Катализируемое формирование индофенолового синего было показано в миелондиы. МПО сначала был назван Мнадиоксидазой 2.