Взаимодействие рицина с клетками гибридом, секретирующих антитела против его каталитической субъединицы

• Автор: Попова, Екатерина Николаевна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 160 с. : ил.

1. Обзор литературы. II

1.1 Токсичные пектины из семян клещевины. Особенности трехмерной организации их молекул.

1.2 Транспорт токсинов в клеткемишени.

Синтез и секреция иммуноглобулинов.

2. Материалы и методы. 4

Материалы.

Выделение токсинов и их субъединиц.

Получение гибридом

Очистка мАт.

Биотинилирование белков

Иммобилизация мАт ВсН и 2ВВК1 на ВгСVактивированную сефарозу 4В.

ПлКаПААГ электрофорез.
Системы ТИФА.
Изучение диссоциации субъединиц В и В
Оценка устойчивости клеток к токсинам с помощью МТТтеста
Выявление признаков апоптоза.
Определение ИбО и ИТ А в супернатантах и лизатах клеток нр и гибридами IВАКЗ,
предобработанных 0.
Получение конъюгатов с флуорохро.мами ФИТЦ и А1еха5б8.
Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия.
Предсказание анпи,енных детерминант ВТ А в области, экранированной ВТ В.
3 Результаты и обсуждение результатов.
3.1 Гибридомы. продуцирующие мАт против нативного рицина и гибридомы. продуцирующие мАт против нативного агглютинина рицина.
3.2 Гибридомы. продуцирующие мАт против частично денатурированной Асубъединицы
рицина.
З 3 Гибридомы, продуцирующие мАт, реагирующие с изолированной Асубъединицей рицина, но
не с гояотоксином
Выводы.
Список литературы


Строение углеводсвязывающих центров в 1а и 2у субдоменах В субъединиц рицина и агглютинина рицина Савочкина Ю. А, г с любезного согласия автора. Согласно данным Е. С. , Савочкина Ю. А., г, в молекуле функционирует только один углеводсвязывающий центр, расположенный в субдомене 1а. Его структура представлена на рис. В , как и в , Тгр образует гидрофобный контакт с молекулой галактозы. Аналогично i и , 2 и i 2 в , в 0ГС4 , 3 , 3 и 4 образуют водородные связи рис. Боковая группа фиксирована в нужном положении водородной связью с . Таким образом, различия в формировании водородных связей с галактозой в рицине и агглютинине рицина обусловлены заменами на и на . В области 2у субдомена 0, соответствующей второму углеводсвязывающему центру , галактоза отсутствует, хотя внешняя поверхность сохраняет форму открытого кармана рис. Вероятно, утрата углеводсвязывающей активности в 2у субдомене 0 связана с заменами Туг8 на i8 и А1а7 на 7. Обе указанные замены приводят к увеличению положительного заряда на данном участке, что препятствует правильной ориентации молекулы галактозы, и, следовательно, образованию водородных связей с соответствующими боковыми группами аминокислотных остатков. Кроме того, результаты, полученные на мутантных , свидетельствуют о том, что гидрофобный контакт Туг8 с молекулой галактозы во втором углеводсвязывающем цен тре рицина необходим для удержания сахара в зоне контакта . Согласно данным сайтспецифического мутагенеза, рекомбинантные , несущие замены в субдоменах 1а и 2у, сохраняли лектиновую активность.