Создание отечественной инновационной технологической платформы для решения актуальных фундаментальных и прикладных задач современной иммунологии на основе ПЦР в реальном времени

• Автор: Трофимов, Дмитрий Юрьевич
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 236 с. : ил.

Меченые праймеры с адаптерной последовательностью . Вытесняющие пробы ii . РНКазы Н, что даст возможность получать более длинные продукты. Далее ПЦР проводят по схеме, описанной выше. Приборы для проведения ПЦР термоциклеры, ДНКамплификаторы, ПЦРамплификаторы, представляют собой устройства для быстрого изменения температуры реакционной смеси по определенной программе. Все современные амплификаторы можно разделить на модели с возможностью детекции накопления ДНКфрагмента в ходе реакции детектирующие амплификаторы и без таковой обычные амплификаторы. Для детектирующих амплификаторов i используют специальные технологии в постановке реакции с применением флуоресцентных красителей. Данные приборы в сравнении с обычными амплификаторами, оснащены дополнительной оптической насадкой, позволяющей регистрировать флуоресценцию в закрытой реакционной пробирке через прозрачную крышку или стенки пробирки непосредственно во время реакции. Одним из основных факторов успешного применения ПЦР на практике является точность реализации заданных исследователем параметров термоциклирования.


Одним из основных факторов успешного применения ПЦР на практике является точность реализации заданных исследователем параметров термоциклирования. Соответствие заданной программы и температуры реакционной смеси в пробирке, в свою очередь, зависит от целого ряда параметров качества пробирок, совместимости амплификатора и пробирок, конструкции и настроек амплификатора. Часто уделяют особое внимание скорости работы амплификатора. Данный параметр особенно актуален для диагностических лабораторий, осуществляющих экспресстестирование с выдачей результатов в течение нескольких часов. Скорость корректной работы термоциклера, обеспечивающей точное соответствие температурной программы
амплификации и параметров реакционной смеси, зависит от конструкции прибора, типа пробирок и объема реакционной смеси. Б настоящее время используют 4 стандартных формата пробирок для ПЦР 0,5 мл 0,6 мл, 0,2 мл, 0,5 мл 4луночный формат и 0, мл луночный формат. Чем меньше объем реакционной смеси, тем меньшее время требуется для достижения заданной температуры в пробирке. Однако минимизация объема имеет ограничения, связанные с необходимостью добавления в реакцию определенною количества стартовой ДНК, концентрация которой не может быть выше конечной концентрации нужного фрагмента. Таким образом, рабочий диапазон объема реакционной смсси без учета объема минерального масла и парафина находится в диапазоне примерно от 1 до 0 мкл. Табл. Сравнение некоторых характеристик наиболее распространенных в России детектирующих амплификаторов.