Генамплификационное тестирование донорской крови на патогены: технологии, системы и стандарты

• Автор: Ёлов, Андрей Александрович
• Шифр специальности: 14.00.29, 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 186 с. : ил.

Введение и общая характеристика работы. Цель и задачи работы. Научная новизна работы. Практическая ценность работы. ГЕНАМПЛИФИКАЦИОННАЯ ДИАГНОСТИКА СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ, ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ литературный обзор. Гснамплификационные методы анализа, их возможности и основные проблемы. Полимеразные цепные реакции и другие генамплификационные методы. ПЦР с горячим стартом. НРА iii i . Система двух зондов с передачей энергии. Гибридизационная детекция на твердой фазе. ПЦР в реальном времени. Внутренние стандарты конкурентного типа. Внутренние стандарты неконкурентного типа. Значение внутренних стандартов при ПЦР в реальном времени
2. Обработка крови и другого клинического материала для генамплификационных анализов. Методы обработки . ДНК и РНК для ПЦРанализа. Упрощенные методы получения препаратов ДНК для ПЦРанализа . Международные стандарты для генамплификационных анализов. Деятельность БовАТ. ЫАТстандарты на РНК ВИЧ. ЫАТстандарт для ДНК ИВУ. ЫАТстандарт для РНК вируса гепатита С. ЫАТстандарт для ДНК парвовируса В.


Кроме того, в последнее время для генодиагностики бактериальных инфекций начала широко использоваться рибосомальная РНК, многокопийность которой позволила резко увеличить чувствительность анализа по сравнению с обычной ДНКПЦР. Естественно, большим достоинством изотермической амплификации является возможность обходиться без термоциклера. Кроме того, такая амплификация полностью аналогична ПЦР в плане возможности использования внутренних стандартов для устранения ложиоотрицатсльных результатов см. Это определяет довольно широкое применение изотермической амплификации в настоящее время и в перспективе. Метод известен под названием i i iii, данным ему фирмой i i Нидерланды, сейчас эта фирма называется iix, на его основе начавшей еще в году выпуск тестсистсмы для определения ВИЧ1, и под названием ТМА iii iii, данным ему фирмой США. Амплификацией, аналогичной ПЦР, является внедренная и развиваемая фирмой лигазная цепная реакция ЛЦР, II. Эта реакция основана не на синтезе новой ДНК, а на соединении лигировании двух олигонуклеотидов на матрице третьего. В реакционную смесь вводятся 4 олигонуклеотидных зонда, два из которых комплементарны определяемой ДНК и при гибридизации непосредственно примыкают друг к другу, а остальные два комплементарны двум первым, то есть совпадают по последовательности с определяемым фрагментом ДНК. После денатурации определяемой ДНК при С производится лигирование зондов на ее матрице при С с помощью термостабильной ДНКлигазы, далее вновь повторяются термические циклы денатурации и лигирования.