Характеристика ядрышкового антигена клеток человека, выявляемого новым моноклональным антителом

• Автор: Григорьев, Андрей Александрович
• Шифр специальности: 14.00.29, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : ил.

1.1. Структура и функции ядрышка

1.2. Реакции клетки и ядрышка на стрессовые воздействия

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клетки.

2.2. Антитела.

2.3. Воздействие ингибиторов

2.4. Методы исследования

2.4.1. Реакция непрямой иммунофлуоресценции.

2.4.2. Выявление фрагментации ДНК методом Т1МЕЬ.

2.4.3. Мечение клеток Вгс1и.

2.4.4. Выявление аргентофильных белков

2.4.5. Выявление микрофиламентов
2.4.6. Обработка РНКазой А и пепсином.
2.4.7. Иммуноблотинг
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Основная характеристика антигена, выявляемого новым моноклональным антителом АЗ.
3.1.1. Оптимизация условий выявления АЗ антигена
3.1.2. Определение видовой специфичности МКА АЗ.
3.1.3. Локализация антигена АЗ в интерфазных и митотических клетках.
3.1.4. Особенности распределения антигена АЗ в ядрышках клеток различных культур.
3.2. Реакция АЗ антигена на действие ингибиторов белкового
синтеза .
3.2.1. Влияние ингибитора белкового синтеза анизомицина на локализацию АЗ антигена в клетках различного тканевого происхождения
3.2.2. Влияние различных ингибиторов белкового синтеза на локализацию АЗ антигена в клетках НеЬа.
3.2.3. Реакция клеток на ингибирование белкового синтеза в зависимости от стадии клеточного цикла
3.2.4. Выявление Абелков после действия анизомицина
3.2.5. Выявление фрагментации хроматина методом ТЖЕЬ
3.2.6. Структура актинового цитоскелета в клетках НеЬа, обработанных
анизомицином.
3.2.7. Колокализация АЗ с другими ядрышковыми белками после инкубации с
анизомицином.
3.3. Выявление аномальной локализации АЗ антигена при
длительном культивировании клеток НеЬа.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Работа выполнена в лаборатории клинической иммунологии Гематологического научного центра РАМН зав. Т.И. Булычева и в лаборатории структурной биохимии Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю. А.Овчинникова РАН зав. О.В. Зацепина
ГЛАВА I. В интерфазном ядре хромосомные территории отделены друг от друга межхроматиновым пространством, которое включает в себя ряд ядерных структур, таких как ядрышки, тельца Кахала, скопления интерхроматиновых гранул и некоторые другие субкомпартменты ii , , i v, . Эти структуры содержат комплексы белков и рибонуклеопротеины и не отделены мембранами от окружающей их нуклеоплазмы. Наиболее хорошо изученным ядерным субкомпартментом является ядрышко. Это наиболее выраженный субкомпартмснт ядра, в котором во время интерфазы происходят процессы транскрипции рибосомной ДНК рДНК, кодирующей , , 5. РНК, процессинг первичных транскриптов прерРНК и сборка прерибосом v . У высших позвоночных каждая единица транскрипции рибосомных генов состоит из следующих элементов энхансеры, промотор, точка начала репликации, терминатор транскрипции, последовательности, кодирующие , , 5. РНК, i, . Послеювательности промоторов рибосомных генов разных таксономических классов сильно отличаются друг от друга. Транскрипционный аппарат одного таксономического класса обычно в общем случае не распознает промотор другого класса ix , . Промотор рДНК состоит из следующих элементов i xi и . Стерсоспецифичное расположение этих элементов необходимо для эффективной инициации транскрипции.