Влияние рекомбинантного растворимого рецептора интерлейкина-5 (А-цепь) на интерлейкин-5-опосредованные эффекты при экспериментальной бронхиальной астме

• Автор: Попова, Ирина Сергеевна
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 127 с. : 31 ил.

1.1. Патогенез бронхиальной астмы
1.1.1. Роль эозинофилов в развитии аллергического воспаления при
бронхиальной астме
1.1.2. Роль интерлейкина5 в патогенезе бронхиальной астмы
1.2. Функциональный рецептор интерлейкина5
1.2.1. Генетические аспекты, структура и функции рецепторного
комплекса интерлейкина
1.2.2. Клонирование отдельных субъединиц рецептора интерлейкина
1.3. Проведение специфического сигнала в клетку
1.4. Антиинтерлейкин5 терапия
1.5. Модели аллергического воспаления i viv
1.6. Молекулярное клонирование
1.6.1. Эндонуклеазы рестрикции
1.6.2. Векторы для клонирования
1.6.3. Введение молекул ДНК в клетки
1.6.4. Методы отбора гибридных клонов
Заключение
Глава 2. Материал и методы
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы
2.2.1. Выделение тотальной РНК
2.2.2. Амплификация РНК в ПЦР
2.2.3. Реакция рестрикции
2.2.4. Лигирование векторной и ПЦРамплифицированной ДНК
2.2.5. Трансформация .i плазмидной ДНК
2.2.6. Микровыделение плазмидной ДНК
2.2.7. Секвенирование ДНК методом химической деградации по
Максаму Гилберту
2.2.8. Электрофорез в агарозных и полиакриламидных гелях
2.2.9. Белковый электрофорез в ПААГ
2.2 Выделение белка на i агарозе
2.2 Получение эозинофилов на градиенте плотности фиколла и
раствора урографина
2.2 Методы оценки жизнеспособности клеток
2.2 Цитоморфологический анализ апоптотической гибели клеток
2.2 Метод индукции и ингибирования апоптотической гибели
2.2 Исследование сократительной активности гладких мышц
бронхов морских свинок
2.2 Гистологическое исследование слизистой оболочки бронхов
2.2 Морфометрическос исследование слизистой оболочки
бронхов
2.2 Анализ экспрессии мРНК ИЛ5 и его растворимого рецептора
2.2 Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
Введение


Современная концепция определяет патогенез БА как специфический воспалительный процесс в бронхиальной стенке, приводящий к развитию обструкции и усилению гиперреактивности бронхов, что вызывает повышенную предрасположенность бронхов к сужению в ответ на воздействие различных аллергенов окружающей или эндогенной природы 7. Особенностью патологических изменений при БА является увеличение активированных эозинофилов, тучных клеток, макрофагов и Тлимфоцитов в слизистой бронхиального дерева и его просвете. Формирование воспалительного процесса в дыхательных путях и вызванное им ремоделирование бронхов представляет собой чрезвычайно сложный механизм, развитие которого опосредуется целым каскадом реакций с привлечением большого разнообразия клеток, факторов и медиаторов. Таким образом, Б А является заболеванием, в развитии которого задействованы механизмы как гуморального, так и клеточного иммунитета 8. При гуморальных реакциях образующиеся из Влимфоцитов плазматическме клетки вырабатывают и секретируют специфические антитела АТ, в то время как в реакции клеточного иммунитета вовлечены Тлимфоциты. Кроме этого Тклетки контролируют функции Влимфоцитов и также участвуют в воспалительных реакциях, реализуя цитотоксическую активность и вырабатывая цитокины. В большинстве случаев гиперчувствительность немедленного типа ГНТ является одним из важнейших патогенетических механизмов, участвующих в формировании воспалительного процесса при Б А . В ответ на попадание в организм аллергена образуются антигенспецифичные АТ Н, которые фиксируются на мембранах тучных клетках и базофилов, и тем самым создают состояние сенсибилизации.