Роль трансформирующего ростового фактора (TGF)β в прогрессии гепатокарцином

• Автор: Макарова, Мария Викторовна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с. : ил.

1. Обзор литературы

1.1. Канцерогенез

1.2. Трансформирующий фактор роста

1.2.1. Процессинг и активация

1.2.2. Рецепторы и адаптерные молекулы к

1.2.3. зависимый контроль транскрипции

1.2.3.1. белки

1.2.3.2. Взаимодействие белков с ДНК

1.2.4. Альтернативные сигнальные пути

1.3. как опухолевый супрессор

1.3.1. Мутации генов, кодирующих компоненты сигнального пути в

опухолях человека
1.3.2. Модельные системы канцерогенеза, в которых показана
супрессорная роль
1.3.3. Механизмы противоопухолевого действия
1.3.3.1. Арест клеточного цикла
1.3.3.2. Индукция апоптоза
1.4. Нроопухолевые эффекты
1.4.1. Гиперэкспрсссия в опухолях человека
1.4.2. Механизмы проопухолевого действия
1.4.2.1. Ускорение пролиферации
1.4.2.2. зависимое уклонение от программы апоптоза
1.4.2.3. индуцирует эпителиальномезенхимальный переход
1.4.2.4. Влияние на способность опухолевых клеток к инвазии
1.4.2.5. Действие на микроокружение опухоли
1.4.2.6. Регуляция ангиогенеза в опухолях
1.4.2.7. Модуляция иммунного ответа
1.5. Гсиатоканцерогснез
1.5.1. Тканеспецифическис транскрипционные факторы
1.5.2.Нарушение функции ГЯФ при гепатоканцерогенезе
1.5.3.Модель одноступенчатой прогрессии ГК мыши
2. Материалы и методы
2.1. Список использованных растворов и сред
2.2. Клеточные линии
2.2.1. Эукариотические клеточные линии
2.2.2. Бактериальные штаммы и плазмидные векторы
2.3. Трансформация клеток . i
2.4.1. Выделение препаративных количеств плазмидной ДНК
2.4.2. Выделение суммарной клеточной РНК
2.5. Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозных гелях
2.6. Метод обратная транскрипция полимеразная цепная реакция ОТ
2.6.1. Подбор и синтез олигонуклеотидных праймеров
2.6.2. Полимеразная цепная реакция ПЦР с обратной транскрипцией

2.7. Иммунофлуоресцентное окрашивание препаратов
2.8. Вестернблот гибридизация
2.9. Трансфекция и инфекция клеток линии ер
2 Трансфекция и инфекция клеток линии НЗЗ
2 Определение количества 1X в культуральной среде
2 Анализ активности репортерного гена люциферазы
2 Измерение скорости роста клеточных линий НерС2 и НЗЗ
21. Определение включения модифицированного нуклеотида в ДНК
22. Измерение кинетики роста клеточных линий т т1го
23. Клоногенный тест
20прсделение способности к инвазии и подвижности клеток
3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Изучение ТСРриндуцирусмых эффектов в клеточной линии Нер
3.1.1. Анализ экспрессии генов, ассоциированных с прогрессией ГК, и генов, ответственных за поддержание дифференцированного статуса гсиатоцитов, при обработке клеточной линии Нер цитокинами ТОРр1 и
3.1.2. Изменение экспрессии изоформ Н4аР1 и Ш4Р4аР2 при ингибировании передачи сигнала от рецептора ТвРр
3.1.3. Активация Итас сигнального каскада в клеточной линии НерС2 под действием 1ХЗРР2
3.1.4. Изменение экспрессии изоформ 1П4Р4хР1 и НМ4аР2 при ингибировании МЕК сигнального пути
3.1.5. Анализ экспрессии генов в клеточной линии Нер, гиперэкспрессирующей ТОРр2
3.1.6. Изменение пролиферативных характеристик клеточной линии НерС2 при гиперэкспрессии ТОР
3.1.7. Анализ активности 8тас1зависимого сигнального каскада при гиперэкспрессии ТСРр2 в культуре гепатомы НсрС2
3.2. Изучение эффектов, вызванных подавлением продукции Тврр2 в клеточной линии НЗЗ
3.2.1. Подавление продукции ТСРР2 в клеточной линии
3.2.2. Анализ экспрессии генов в клеточной линии НЗЗ, трансфицированной миРНК кТОР
3.2.3. Изменение скорости пролиферации культуры клеток НЗЗ при подавлении продукции ТСР
3.2.4. Исследование подвижности и инвазии клеток НЗЗ при подавлении продукции ТСР
3.2.5. Анализ функциональной активности 5тас1 белков в культуре клеток НЗЗ
Заключение
Выводы
Список литературы


Да, который расщепляется с помощью фуриновых протеаз в трансГольджи . В результате процессинга образуется димерная форма активного с молекулярной массой кДа и отщепившийся полипептид так называемый , который также остается в димерном состоянии. В отличие от различных форм процессинга белков, в данном случае отщепившийся полипептид не утилизируется клеточными системами, а остается связанным с активной формой за счет нековалентных взаимодействий. В таком виде сскретируется во внеклеточный матрикс ВКМ, где с помощью дисульфидных связей присоединяется к специальным белкам ii i. Комплекс, состоящий из , и с массой, равной 5 кДа, получил название большого латентного комплекса Рис. Существует четыре типа , и их распределение в разных тканях отличается. I экспрессируется во многих органах, 2 продуцируется в сердце, легких, плаценте, а также в печени и мышцах, тогда как 3 экспрессируется в костях, легких и сердце, 4 в мочевом пузыре, клетках тонкого кишечника и в сердце i . ВКМ. Однако в последнее время появляется все больше данных, свидетельствующих в пользу того, что играют роль не только в локализации , но и в его активации ii . К тому же, например, в печени крыс при обширном фиброзе наблюдается изменение спектра экспрессии изоформ по сравнению с нормальной печеныо i . Для активации необходимо освободить его из комплекса с белком, в этом процессе могут участвовать различные нротеазы плазмин, метаплопротеаза ММР2, ММР9 . В процессе активации i также участвовать различные интегрины, рецептор маннозы6фосфата, декорин и тромбоснондин1.