Программированная гибель клеток в механизмах циторедуктивной терапии опухолей

• Автор: Блохин, Дмитрий Юрьевич
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 229 с. : 46 ил.

1.1. Молекулярный и супрамолекулярные уровни организации ДНК в клетках эукариот.

1.1.1. Первичная структура ДНК

1.1.2. Вторичная структура ДНК

1.1.3. Структуры ДНК высших порядков организации.

1.2. Суперспиральная конформация кольцевых молекул ДНК.

1.3. Суперспиральная ДНК клеточного ядра эукариот.

Глава 2. Результаты собственных исследований

2.1. Капиллярная эластовискозиметрия нуклеоидов эукариот

2.2. Супрамолекулярная организация нуклеоидов эукариот

2.3. Прочно связанные с ДНК остаточные белки.

2.4. Белковый состав ядерного матрикса в клетках различных тканей.

2.5. Изменение супрамолекулярного комплекса ДНК под действием противоопухолевых химиотерапевтических препаратов.
Резюме.
ЧАСТЬ II. ПРОГРАММИРОВАННАЯ ГИБЕЛЬ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ
ТЕРАПЕВТИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Глава 3. Программированная гибель клеток Обзор литературы
3.1. Программированная гибель клеток
3.2. Каспазы
3.3. Рецепторы смерти
3.4. Роль митохондрий
3.5. Роль факторов роста
3.6. Гранзимы
3.7. Белки теплового шока
3.8. Транскрипционные факторы кВ и р
3.9. Протеасом ы
3 Другие сигнальные системы гибеливыживания клетки
3 Программированная гибель меток в механизмах циторедуктивной 3 терапии
Глава 4. Материалы и методы исследования
4.1. Материал ы.
4.1.1. Клеточные линии и культуры
4.1.2. Противоопухолевые препараты и цитотоксины.
4.1.3. Моноклональные антитела
4.1.4. Реагенты и наборы реактивов
4.2. Методы исследования.
4.2.1. Реакция поверхностной иммунофлуоресценции РИФ.
4.2.2. Инкубация клеток с противоопухолевыми препаратами i vi.
4.2.3. Определение доли гиподитоидных клеток.
4.2.4. Выявление апоптотических клеток методом .
4.2.5. Выявление апоптозных клеток методом прижизненного двойного 7 окрашивания Аннексином VI и I
4.2.6. Проточная цитофлюориметрия.
4.2.7. МТТ тест пролиферативной активности клеток 8
4.2.8. Определение половинной ингибирующей концентрации I 9 противоопухолевых препаратов и цитотоксинов
4.2.9. Получение фрагментов МКА.
4.2 Иммуноблоттинг
4.2 Определение активации каспазы3.
4.2 Конкурентная гибридизация кДНК на экспрессионных ДНК 1 микрочипах.
4.2 Анализ протеинового профиля
4.2 Световая светлопольная и фазовоконтрастная микроскопия.
4.2 Флюоресцентная микроскопия
4.2 Изготовление иммуномагнитного анти препарата
Глава 5. Рецепторнолигандный и лекарственноиндуцированный апоптоз.
5.1. Характеристика методов регистрации апоптоза.
5.1.1. Гйподиплоидные клетки
5.1.2. Регистрация накопления нитевых разрывов ДНК
5.1.3. Флиппинг фосфатидилсерина клеточной мембраны
5.1.4. Сопоставление результатов оценки субпопуляции погибающих 4 клеток, полученных разными методами.
5.2. Индукция апоптоза МКА , I и 5 противоопухолевыми препаратами.
5.3. Блокирование лекарственноиндуцированного апоптоза г 9 фрагментами антиС5.
5.4. Экспрессия на поверхности клеток после инкубации с 2 противоопухолевыми препаратами
Глава 6. Получение С5негативных клеточных линий.
6.1. Деплеция СВпозитивной популяции Тлимфобластных клеток
6.2. Лекарственная индукция апоптоза клеток линии и А4.
Глава 7. Сравнительные характеристики клеток двух родственных линий.
7.1. Сравнительный анализ транскрипционной активности генома 8 клеток обеих линий
7.2. Регуляция экспрессии отдельных генов при рецепторнолигандной 8 индукции апоптоза.
7.3. Протеомный профиль клеток обеих линий.
7.4. Состояние про и антиапоптогенных сигнальных путей в клетках 3 двух линий.
7.5. Возможная роль в антиапоптогенной программе клеток 6 линии А4.
Глава 8. Лекарственная чувствительность двух родственных клеточных линий i 1
8.1. Сравнительные спектры чувствительности клеток к 1 противоопухолевым лекарственным средствам.
8.2. А нализ клеточн ых популяций двух линий, переживших 2 цитотоксическую терапию.
8.3. Возможные причины расхождений результатов оценки 6 цитотокси ческой эффекпшвности.
Часть III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Заключение
Выводы
Список цитированной литературы


В рамках настоящего исследования из всего многообразия негистоновых белков хроматина следует выделить компоненты ядерного матрикса скелетной фибриллярногранулярной структуры ядра и небольшую группу обычно сопутствующих им белков компоненты подмембранного фиброзного слоя ядра ламины, белки ядерных пор и некоторые другие. Ядсрный матрикс морфологически представляет собой пространственный каркас интерфазного ядра клетки, к которому определенным образом прикреплена молекула ДНК Рис. Анализ сведений из литературы позволяет заключить, что ядерный матрикс не соответствует какойлибо морфофункциональной структуре интерфазного ядра, а представляет собой остаточный продукт последовательных экстракций изолированных клеточных ядер неионными детергентами, эндонуклеазами и концентрированными солевыми растворами, т. Рис. Трансмиссионная электронная микрофотография препарата интерфазного хроматина 0. Несоответствие термина ядерный матрикс строго определенному образованию связано, вопервых, с методической сложностью выделения фибриллярногранулярной сети в чистом виде и с достаточной интактностью структуры, а вовгорых, с изменчивостью самой этой сети в процессе функционирования клетки, что связано с выполнением ядерным матриксом не только механических скелетных функций пространственной организации хроматина, но и с его участием в осуществлении и регулировании генной активности. В процессе жизнедеятельности клетки ядерный матрикс, подобно цитоскелету, выполняет активную роль, что позволяет говорить о его динамичной структуре 3. Судьба белков ядерного матрикса в митозе окончательно не выяснена по одним данным, часть иммуногенных белков матрикса переходит в цитоплазму , 2, по другим состав ядерного матрикса не отличается от состава каркаса мегафазных хромосом 7, 6.