Нарушение отдельных генов клеточного цикла на различных стадиях развития опухолей гортани

• Автор: Балукова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : 21 ил.

ВВЕДЕНИЕ. 6
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Современные тенденции в развитии исследования рака гортани и маркеры, ассоциированные сданной патологией.
1.1 Введение.
1.2 Прсдопухолевые заболевания гортани.
1.3 Рак гортани элементы эпидемиологии и этиология
1.3.1 Влияние алкоголя и канцерогенов табака.
1.3.2 Влияние вирусной инфекции
1.3.3 Влияние пола на особенности возникновения РГ.
1.4 Значимость наследственных факторов при развитии рака гортани.
1.4.1 Полиморфизм генов глутатионБтрансферазы аассоциированный с развитием РГ
1.5. Молекулярногенетические изменения, связанные с клеточной пролиферацией
1.5.1 Клеточный цикл.
1.5.2 Белки, участвующие в регуляции клеточного цикла
1.5.3. Регуляторы циклинзависимых киназ
1.5.4 Субстраты циклинзависимых киназ
1.6 Нарушения генов клеточного цикла в опухолях человека.
1.6.1 Инактивация р1б тш и р ШК4В
1.6.2 Нарушения ЯЬ.
1.7 Нарушения генов участвующих в процессе программированной клеточной смерти.
1.8 Заключение.
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Характеристика обследованных больных
2.2 Получение, обработка и гистологический анализ тканей
2.3 Молекулярные ДНКзонды и микросателлитные маркеры.
2.4 Выделение нуклеиновых кислот
2.4.1. Выделение ДНК из биопсий
2.4.2 Выделение РНК из биопсий.
2.4.3 Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови
2.5. Спектрофотометрическое определение концентрации ДНК
2.6 Синтез кДНК
2.7 Бисульфитный мутагенез ДНК
2.8 Полимеразная цепная реакция.
2.9. Электрофоретическое разделение ДНК
2.9.1 Электрофорез ДНК в агарозном геле.
2.9.2 Электрофорез ДНК в неденатурирующем полиакриламидном геле
2.9.3 Электрофорез продуктов ТЩР в денатурирующем
полиакриламидном геле.
2. Перенос ДНК из полиакриламидного геля на нейлоновые фильтры
2 Радиоактивное мечение зондов методом кинирования
2 Гибридизация ДНК, иммобилизованной на нейлоновых фильтрах
2. Иммуногистохимия.
2 Статистическая обработка данных.
2. Список основных растворов и сред, использованных в работе
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Результаты исследования потери гетерозиготности в зоне
локализации генов р1б,К4а, , 2
3.1.1 Определение потери гетсрозиготности в прсдраке и доброкачественных опухолях гортани
3.1.2 Исследование молекулярногенетических нарушений в динамике развития заболевания.
3.1.3 Определение потери гетерозиготности в злокачественных опухолях гортани
3.1.4 Внутриопухолсвая молекулярногенетическая гетерогенность
в доброкачественных и злокачественных опухолях гортани.
3.1.5. Определение потери гетсрозиготности в условноконтрольной группе.
3.1.6. Сравнительный анализ молекулярных нарушений в эпителии слизистой оболочки гортани среди курильщиков и некурящих
индивидуумов.
3.2 Исследование метилирования промотора гена
р1бШК4А
3.3. Экспрессия генов рЫК4л, 5I4, и 2 в предопухолевых и опухолевых поражениях слизистой оболочки гортани. Корреляция со структурными нарушениями исследуемых генов.
3.3.1 Определение экспрессии р методом
и м му н о ГИСГОХ и м и и.
3.4 Определение папилломавирусной инфекции в исследованном
материале
3.4.1. Опеределение экспрессии белков папилломавирусов
методом иммуногистохимии.
4. ОбСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ. НО
ВЫВОДЫ. из
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Показано, что случаи инфекции эпидермоидных клеток V типа, столь характерные для опухолевого поражения плоского эпителия шейки матки и кожи, крайне редко наблюдаются при раке гортани, где превалируют случаи выявления V типа. Практическая значимость. Полученные результаты будут иметь теоретическое значение для понимания механизмов возникновения и прогрессии злокачественных новообразований и для выявления особенностей регуляции клеточного цикла в различных типах опухолей гортани. После дополнительного тестирования может быть предложен набор необходимых молекулярногенетических маркеров для ранней диагностики неоплазии гортани иили при составлении индивидуального прогноза. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современные тенденции в развитии исследования рака гортани и маркеры, ассоциированные с данной патологией. Введение. Известно, что процесс, в течение которого нормальные клетки начинают интенсивно пролиферировать и трансформироваться в злокачественные, требует последовательного накопления мутаций, возникающих вследствие повреждения генома. Данные нарушения могут быть результатом эндогенного процесса, включающего ошибки репликации Д1 ГК, существенную химическую нестабильность некоторых пар оснований ДНК или атаку свободными радикалами, образующимися при метаболизме клетки. Подобные изменения могут возникать и в результате воздействия экзогенных факторов ионизирующего и ультрафиолетового излучения, или химических канцерогенов . В процессе малигнизации повреждаются гены, обеспечивающие гомеостатические механизмы. В результате этого одна группа генов онкогены активируется. В случае структурных изменений или повышения уровня экспрессии этих генов нарушается контроль нормального роста и дифференцировки клеток, что приводит к трансформации. Функция других геновсупрессоров аптиопкогенов, кодирующих ключевые регуляторные белки, подавляется. Потеря данных генов, как правило, влечет за собой нарушение контроля пролиферации. Кроме того, существует большая группа геновмодуляторов, не отвечающих за злокачественную трансформацию клеток, но способствующих распространению опухоли в организме ,. Нарушение в структуре иили функционировании некоторых из этих генов, связанных с регуляцией программированной клеточной смерти, в часгности, апоптозом или аутофагией, может приводить к образованию быстро растущих опухолей, или опухолей резистентных к противоопухолевой терапии лучевой, химиотерапии ,5. В настоящее время накоплен достаточно большой объем данных, касающихся проблемы возникновения рака гортани и его связи, как с канцерогенами табачного дыма, так и с другими агентами, вызывающими данную патологию. Однако до сих пор неясно, нарушения каких генов и в какой последовательности являются необходимыми для возникновения опухолей данной локализации. Также остается открытым вопрос о столь большой разнице в заболеваемости и смертности от рака гортани между мужчинами и женщинами. Целыо данного обзора является обобщение информации об известных молекулярных нарушениях генов регуляторов клеточного цикла, ассоциированных с развитием РГ. Детекция некоторых из таких нарушений может служить характеристикой тех или иных клинических параметров как в группах больных РГ, так и отдельных пациентов. Предопухолевые заболевания гортани. За последние годы отмечается неуклонный рост показателей заболеваемости населения злокачественными опухолями верхних дыхательных путей. В первую очередь эго относится к раку гортани, который составляет наблюдений среди опухолевой патологии верхних дыхательных путей. Высокие показатели на 0 тыс. ЮгоВосточной Европе, среди чернокожего населения США, низкие в Азии и Африке. Смертность от рака гортани высока в Венгрии, Польше, Франции, Испании 4. Доброкачественные образования составляют довольно многочисленную группу болезней гортани. В этой группе выделяют опухолеподобные заболевания и доброкачественные опухоли, причем первые более многочисленны. К опухолеподобным заболеваниям гортани относятся узелки голосовых складок узелки певцов, полипы, кисты, нсспсцифические гранулемы.