Молекулярная природа повреждений онкогена HRAS1 в карциномах молочной железы и легких человека

• Автор: Бабенко, Виктор Иванович
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1992
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 128 с.

1.1. Происхождение, локализация и структура онкогена

НВА у человека

1. 2. Идентификация мутаций б онкогене ННА.

1.3. Выяснение молекулярного механизма активации

онкогена ННАБ в неоплазмах человека

1. 3.1. Структурные перестройки, амплификации и

делеции аллелей.

1.3.2. Точковые мутации возможный механизм активации протоонкогена.

1. 4. Использование полимеразной цепной реакции для анализа мутаций в кодирующих последовательностях онкогена НЯАЗ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Опухолевый материал, химические реактивы, ферменты

и оборудование
2. 2. Радиоактивное мечекие олигонуклеотидов.
2. 3. Полимеразная цепная реакция ГЩР амплификация
ДНК, рестрикционный анализ и электрофорез
2. 4. Праймерзависимая амплификация двух участков онкогена НЯА
2. 5. Определение первичной нуклеотидной последовательности секвенирование амплифицированной ДНК методом
Максама Гилберта.
2. 5.1. Элюция фрагментов ДНК из геля путем диффузии в буфер .
2.5.2. Химические реакции расщепления ДНК
2. 5. 2.1. Гидролиз ДНК по модифицированным основаниям
ГЛАЗА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ОБСУВДЕНИЕ.
3.1. Рекомбинантные плазмиды рВЕ1 и рВБ2, содержащие
последовательности 1 и 2 экзонов онкогена НБАЗ. .
3. 2. Выявление точковььх мутаций в онкогене ННАЗ в ДНК клеток рака молочной железы РМЖ.
3. 3. Поиск точковых мутаций в онкогене ННАЗ в ДНК клеток рака легкого РЛ, рака толстой кишки РТК,
рака щитовидной железы РЩЕ и рака яичника РЯ
3. 4. Анализ возможной контаминации образцов ДНК из карциномы молочной железы и других опухолей плазмидами,
содержащими мутантный онкоген НЕАЗ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Полученные результаты имеют важное значение для понимания роли точковых мутаций в канцерогенезе у человека, с одной стороны, а с другой будут способствовать разработке молекулярнобиологических основ определения прогноза, а в будущем, возможно, и диагностики злокачественных новообразований у людей. ГЛАВА 1. Канцерогенез или формирование опухоли представляет собой многостадийный процесс, который условно можно разделить на инициацию и промоцию. Повидимому, действие только инициирующих факторов к их числу относят химические канцерогены, вирусы, ионизирующую радиацию, ультрафиолетовое облучение, ошибки в репликации ДНК и ряд других неизученных факторов не может привести к возникновению опухоли. Для того чтобы процесс нарушения клеточного деления закрепился и появился клон клеток с неконтролируемым ростом, необходимо действие и других факторов, таких как специфические промоторы, воспаление и полипептидные факторы роста Князев П. Г. и др. Киселев Ф. Л. и др. Как происходит трансформация клетки при воздействии ка нее различных факторов, показано на рис. При этом инактивация антионкогенов или супрессорных генов сопровождается нарушением положительной регуляции, сдерживающей неограниченную пролиферацию клетки. В настоящее время установлено, что это происходит либо посредством мутаций, либо делецией уча ,стков диких аллелей. В этом случае дикий аллель, как правило, элиминируется или в нем также появляется дополнительная мутация, приводящая к полней биохимической инактивации генетического продукта супрессорного белка. Следует сказать, что, начиная с появления точковей мутации в протоенкогене или антионкогене, наступают необратимые процессы перерождения клетки в злокачественную.