Использование метода полимеразной цепной реакции в системе санитарно-вирусологического контроля загрязнения воды различных водных объектов энтеровирусами

• Автор: Лаврова, Дарья Вильямовна
• Шифр специальности: 14.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ I

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Введение.

ГЛАВА 2. Использование методов концентрирования для устранения

ингибиторов ОТПЦР.

ГЛАВА 3. Использование методов выделения РНК вирусов для

устранения ингибиторов ОТПЦР

ГЛАВА 4. Сравнение методов культуры клеток и ОТПЦР для индикации энтеровирусов в пробах воды
ГЛАВА 5. Использование метода ОТПЦР, интегрированной с культурой клеток ИКК ОТГ1ЦР для анализа энтеровирусного
загрязнения проб воды
ГЛАВА 6. Возможности использования ОТПЦР для контроля инфекционных энтеровирусов в пробах воды, прошедшей обработку
УФО и хлором.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ЧАСТЬ II
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 1. Использование метода ОТПЦР, интегрированной с
культурой клеток, для индикации РНК цитопатогенных энтеровирусов в
пробах воды
ГЛАВА 2. Отработка метода выделения РНК из концентратов сточных
вод и вод поверхностных водоисточников.
ГЛАВА 3. Изучение оптимальных режимов элюции полиовируса для обеспечения высокой эффективности их последующей детекции методом ОТПЦР.
3.1. Изучение оптимальных режимов элюции энтеровирусов для обеспечения высокой эффективности их последующей детекции методом ОТПЦР, используя метод концентрирования на колонках с ионообменной смолой АВ
3.2. Изучение оптимальных режимов элюции энтеровирусов для обеспечения высокой эффективности их последующей детекции методом ОТПЦР, используя метод концентрирования на мембранном фильтре ММК
ГЛАВА 4. Изучение возможности использования ОТПЦР для контроля цитопатогенных энтсровирусов в пробах воды, прошедшей обработку дезинфектантами
4.1. Изучение возможности использования ОТПЦР для контроля цитопатогенных энтеровирусов в пробах воды, прошедшей обработку УФО
4.2. Изучение возможности использования ОТПЦР для контроля цитопатогенных энтеровирусов в пробах воды, прошедшей обработку
УФО, хлором и комбинированную обработку УФО и хлором.
ГЛАВА 5. Апробация методов ОТПЦР и ИКК ОТПЦР на натурных объектах в условиях вспышечной заболеваемости и в межэпидемичсский
период.
ГЛАВА 6. Разработка схем санитарновирусологического контроля
воды с использованием методов ОТПЦР и ИКК ОТПЦР
ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Поверхности
мембранных фильтров обычно заряжены отрицательно. Вирусы же, как правило, при нейтральных значениях также заряжены отрицательно и не адсорбируются. Однако если среды становится меньше 4, матрица мембраны перезаряжается, она становится положительно заряженной и начинает адсорбировать вирусные частицы. Таким образом, если водную пробу подкислить, а затем профильтровать через мембрану, то практически все вирусные частицы свяжутся с мембраной 8,. Добавление катионов, особенно многовалентных, таких как алюминий, увеличивает эффективность перезарядки матрицы мембраны ,,8. Разработаны фильтры, несущие в нейтральной области положительный заряд 8,, что позволяет избежать необходимости подкисления воды на стадии адсорбции вирусов. Кроме того, фильтры модифицируют и другими методами. В качестве примера можно привести метод обработки фильтра растворами солей хлорида железа и после высушивания гидридом магния, алюминия, натрия или аммония 8. Концентрирование вирусов из воды на положительно заряженных мембранах 1 в настоящее время является одним из наиболее используемых методов . Этот метод применяется для водопроводной воды ,0,2, подземной , речной 5, вторично очищенных сточных вод 8 и морских вод 5,4. Использование положительно заряженных мембранных фильтров подходит для устранения веществ, ингибирующих ОТПЦР, без дополнительной очистки проб 8. Однако, эффективность концентрирования вирусов из морской воды не всегда высока изза низкой адсорбции вирусов на положительно заряженной мембране. Это происходит изза влияния солей .