Исследование популяции Staphylococcus aureus в объектах ветеринарно-санитарного контроля и разработка ускоренных методов его индикации

• Автор: Денисова, Елизавета Аркадьевна
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. и формы его существования в объектах

ветеринарносанитарного контроля и окружающей среды .

1.1.1. Факторы вызывающие образование форм

1.2. Способы контроля различных форм бактерий.

1.2.1. Микробиологические методы

1.2.2. Гибридизация нуклеиновых кислот

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Цель и задачи исследования

2.2. Объекты и методы исследования.

2.2.1. Методы исследования популяций бактериальных клеток
2.2.1.1. Метод определения чувствительности бактерий к действию
антибиотиков
2.2.1.2. Метод исследования популяции бактериальных клеток с
использованием мембранных фильтров
2.2.1.3. Метод выращивания бактерий в полужидком агаре на
мембранных фильтрах.
2.2.1.4. Метод определения степени реверсии бактериальных клеток
после воздействия антибиотиков
2.2.1.5. Метод изучения температурного фактора на бактериальные
клетки
2.2.2. Приготовление препаратов для сканирующей электронной
микроскопии.
2.2.3. Контаминация мясопродуктов и водных объектов
микроорганизмами
2.2.4. Микробиологические методы определения
в пищевых продуктах.
2.2.5. Контроль на основе методов ДНК
гибридизации.
2.2.5.1. Выделение и очистка ДНК из бактерий
2.2.5.2. Выделение и очистка ДНК с использованием
гуанидинтиоизоционата
2.2.5.3. Включение трития в бактериальные ДНК методом
никтрансляции.
2.2.5.4. Включение биотина в бактериальные ДНК методом
никтрансляции.
2.2.5.5. Включение метки в ДНК методом рассеяной затравки
2.2.5.6. Получение меченых ДНКзондов с помощью полимеразной
цепной реакции.
2.2.5.7. ДНКгибридизация на мембранных нитроцеллюлозных
фильтрах с реперными ДНК мечеными тритием
2.2.5.8. Точечная ДНКгибридизация на мембранных фильтрах с
биотииилированной ДНК
2.2.6. Статистическая обработка результатов.
2.3. Результаты исследования
2.3.1. Изучение популяции после воздействия неблагоприятных факторов антибиотики, температура с использованием микробиологических и
электронномикроскопических методов.
2.3.2. Разработка метода дифференциального определения вегетативных и форм бактерий в объектах ветеринарносанитарного контроля с использованием ДНКгибридизации
на мембранных фильтрах.
2.3.3. Разработка метода индикации в
объектах ветеринарносанитарного контроля с
использованием высокоспецифичиых генных зондов.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Кокки делящиеся, более чем в одной плоскости, склонны не расходиться после деления и поэтому образуют скопления сферической или неправильной формы. Поверхностные структуры клетки представляют собой сложную систему антигенов, обладающих разнообразными биологическими свойствами пептидигликан, белок А, капсульный материал и другие антигенные факторы. При этом, основными компонентами клеточной стенки являются пептидогликан и связанные с ним тейхоевые кислоты 2, , . Патогенность . Вирулентность стафилококков обуславливается рядом факторов и колеблется в широких пределах. Патогенные стафилококки
продуцируют большое количество ферментов и токсинов, обладающих разносторонним действием на организм. Патогенные стафилококки выделяют ферменты плазмокоагулазу, фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу, лецитиназу, и др. Токсины подразделяются на экзо и энтеротоксины. Данный токсин термолабилен, таккак разрушается при С. Энтеротоксин золотистого стафилококка при попадании в организм животного и человека вызывает токсикозы за счет длительного сохранения в пищевых продуктах, даже в отсутствии бактериальных клеток 2, , , , , 9. Развитие . При стерилизации и пастеризации продукции основная часть микрофлоры погибает. Незначительная часть клеток стафилококка в результате своей устойчивости может оставаться не измененной или переходить в гетероморфизм с образованием форм, которые при благоприятных условиях реверсирует в исходное состояние и снова начинает размножаться с выделением большого количества энтеротоксина. Рядом авторов было показано, что молочнокислые бактерии i, и другие тормозят развитие стафилококков и образование ими токсина в результате изменения реакции среды з кислую сторону. Аналогичное действие на культуру золотистого стафилококка оказывает микрофлора йогурта и бифидобактерий. Задержка развития стафилококков и образование токсина были выявлены также при изменении температуры. Так при температуре С торможение токсинообразования было более интенсивное, чем при С , ,, 9, 1. Имеются сведения о том, что в молочных и мясных продуктах некоторые виды бактерий рода угнетают развитие стафилококка. Ингибиторные свойства в отношении токсинообразования стафилококков проявляют . Выявление . Также изза повышенной устойчивости к изменениям внешней среды стафилококк является тестобъектом при исследовании бактерицидных свойств дезинфицирующих средств 8, , , , 1, 4, 9. Установлено, что действие неблагоприятных факторов внешней среды абиотической и биотической природы приводит к переходу бактериальных клеток в гетероморфизм с различными проявлениями трансформации, включая образование форм, которые при благоприятных условиях могут реверсировать в исходное состояние с восстановлением морфобиологических свойств , . Гетероморфизм это одна из форм биологической реакции бактерий, способствующая выживанию и сохранению вида в условиях кратковременного действия различных химических, физических и биологических факторов, при устранении которых гетероморфные формы реверсируют. На данном этапе установлены закономерности гетероморфизма бактерий и четко разграничено понятие естественного и искусственного полиморфизма. Примером естественного полиморфизма может служить образование клегок размером до мкм у . Примером
искусственного полиморфизма являются нитевидные формы ii i, образующиеся под действием пенициллина , , 3. Гетероморфный рост бактерий имеет несколько стадий развития. При этом к гетероморфным формам относят как типичные бактериальные клетки, так и крупные клетки в раз превышающие типичные по своим размерам и характерные для лагфазы и начального периода логарифмического роста. Увеличение размеров клеток обусловлено их более активным ростом на фоне замедленного деления. По своей морфологической характеристик, такие клетки близки формам несбалансированного роста, возникающим под влиянием неблагоприятных воздействий. Формы несбалансированного роста включают гетероморфные клетки, имеющие чаще всего увеличенную неправильную форму и измененную клеточную стенку, способные к репродукции путем равномерного или равновеликого деления.