Совершенствование методов идентификации примесей ГМИ в продуктах, содержащих компоненты животного и растительного происхождения

• Автор: Каверин, Артем Валерьевич
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил.

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Роль ГМИ в обеспечении питания населения

1.2 Проблемы безопасности продукции содержащей ГМИ.

1.3 Методы определения ГМИ

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы

2.1.1 Отбор и подготовка проб для исследования.

2.1.2 Методика выделения ДНК с использованием детергента СТАВ

2.1.3 Методика выделения ДНК с использованием сорбента ii

2.1.4 Методика качественного определения ГМИ на основе ПЦР с электрофоретической детекцией ампликонов

2.1.5 Методика качественного определения ГМИ с помощью ПЦР в реальном времени

2.1.6 Методика количественного определения ГМИ с помощью ПЦР в реальном времени
2.1.7 Статистическая обработка результатов
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Разработка и оптимизация методов выделения и очистки ДНК из продукции животного и растительного происхождения.
2.2.2. Сравнительная характеристика методик выделения ДНК.
2.2.3. Совершенствование методики качественного определения ГМИ на основе ПЦР с электрофоретической детекцией ампликонов.
2.2.4. Разработка модифицированной методики качественного
определения ГМИ на основе ПЦР в реальном времени.
2.2.5. Совершенствование методики количественного определения ГМИ на основе ПЦР в реальном времени
2.2.6. Проведение мониторинговых исследований по выявления фальсифицирующих примесей
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
4. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
6. ПРИЛОЖЕНИЕ 2
ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


Сейчас средний россиянин съедает в год кг натурального мяса и рыбы, что на меньше медицинской нормы. При продолжающейся замене животных белков соевыми он в годах уже Будет съедать только кг животных белков . В г. Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по субъектам Российской Федерации, исследовано 2 пробы продовольственного сырья и пищевых продуктов г. При проведении исследований выявлено пробы г. ГМО, что составило 7,6 г. В импортируемых пищевых продуктах компоненты ГМО содержались в 6,5 г. Наиболее часто ГМО встречаются в мясных продуктах ,8 г. В связи с этим необходимо идентифицировать продукцию содержащую примеси ГМИ в продуктах животного и растительного происхождения. На сегодняшний день это является одной из актуальнейших задач биотехнологии. Для этого необходимо разработка и создание высоко эффективных диагностических методик для выявления трансгенных растений в пищевых продуктах, продовольственном сырье, семенном материале, кормах животных, лекарственном сырье. Основой современных методик служат качественные и количественные методы. Данные методики должны позволять проводить определение ГМИ как термообработанных продуктах так и нативных. Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось совершенствование методов идентификации примесей ГМИ в продуктах, содержащих компоненты животного и растительного происхождения. ГМИ в продуктах животного и растительного происхождения. Научная новизна. Разработаны модифицированные высокоэффективные методики выделения ДНК с использованием ионного детергента СТАВ цетилтриметиламмониум бромида, а также с использованием сорбента ii i. Разработанные методики позволяют получать свободную от ингибирующих примесей и в необходимых количествах ДНК из различных продуктов, содержащих компоненты животного и растительного происхождения. ДНК пригодна для качественного и количественного анализа. Методики могут использоваться для экстракции и очистки ДНК как многокомпонентных смесей, так и однокомпонентных. Усовершенствованы методики качественного определения ГМИ сои и кукурузы, включающие экспрессное выделение ДНК с использованием сорбента ii i или ионного детергента СТАВ цетилтриметиламмониум бромида, постановку ПЦР с использованием праймеров на лектин и крахмальную синтазу и последующим электрофоретическим разделением ампликонов. Проведены исследования по совершенствованию методик определения ГМИ на основе ПЦР в реальном времени, включающие экспрессное выделение ДНК с использованием сорбента ii i или использование
ионного детергента СТАВ цетилтриметиламмониум бромида, амплификации ДНК с мечеными ДНКзондами представляющие собой олигонуклеотид, несущий флуоресцентный краситель и флуоресцентный гаситель, используемые для качественной и количественной оценки продукта. Разработана модифицированная методика качественного обнаружения ГМИ с использованием промотора, терминатора и внутреннего положительного контроля в одной реакционной смеси, включающую ускоренную пробоподготовку и оценку результатов на основе ПЦР в реальном времени. Показана высокая чувствительность и специфичность разработанных количественных методик модифицированных методик количественного определения ГМИ на основе ПЦР в реальном времени сои линии , кукурузы линии 0, позволяющих обнаруживать в образце ГМИ менее 0,1 как в сырье, так и в продуктах питания, в том числе термообработанных. Время анализа сокращается в 1, раза. Проведены мониторинговые исследования в сырье и продуктах питания с использованием разработанных методик, показавших возможность использования их для скрининговых и количественных тестов выявления недекларированных ГМИ в продуктах животного и растительного происхождения. Практическая ценность. РАСХН г. Апробация работы. Ученого совета ВНИИВСГЭ г. ВНИИВСГЭ г. V Международной научной конференции Живые системы и биологическая безопасность населения Москва, МГУ ПБ, г. Публикации. Результаты исследований отражены в 5 научных статьях. Положения, выносимые на защиту. ГМИ в продуктах животного и растительного происхождения.