Технология изготовления белково-целлюлозных комплексов из микобактерий и их иммуногенные свойства

• Автор: Шамов, Владимир Васильевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 152 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микобактерии и их свойства.

1.2. Химическая структура микобактерий туберкулеза.

1.2.1. Белки микобактерий.

1.2.2. Полисахариды микобактерий.

1.2.3. Липиды микобактерий.

1.3. Строение клетки микобактерий.

1.3.1. Клеточные оболочки микобактерий

1.3.2. Цитоплазма микобактерий

1.3.3. Рибосомы микобактерий
1.4. Механизм иммунного ответа при туберкулезе
1.4.1. Гиперчувствительность замедленного типа
в противотуберкулезном иммунитете
1.5. Вакцины из убитых микобактерий и иммуногенные фракции
1.6. Заключение к обзору литературы.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы и методы исследования
2.2. Приготовление суспензии целлюлозы из хлопковой ваты
2.2.1. Получение неактивированной целлюлозы.
2.2.2. Получение целлюлозы, активированной путем окисления перйодатом натрия.
2.2.2.1. Определение окисленных альдегидных групп
в окисленной целлюлозе.
2.3. Использование ПГ1Дтуберкулина в качестве антигена,
иммобилизованного на целлюлозе
2.3.1. Присоединение белка к частичкам окисленной суспензии целлюлозы
2.3.2. Присоединение белка к частичкам суспензии неактивированной целлюлозы
2.4. Изучение иммуногенных и протективных свойств белковоцеллюлозных комплексов из ППДтуберкулина
на белых мышах
2.4.1. Изучение иммуногенных свойств конъюгатов с использованием мышей линий ВАЬВс и СВЕ6.
2.4.2. Иммуногенные и протективные свойства конъюгатов,
изученные на мышах линии СВА.
2.5. Белковоцеллюлозные комплексы из антигенов, выделенных
из разрушенной культуры БЦЖ.
2.5.1. Технология выделения антигенов из культуры БЦЖ.
2.5.2. Иммобилизация антигенов, выделенных из разрушенной
культуры БЦЖ на целлюлозной матрице
2.5.3. Изучение протективных свойств полученных препаратов
на морских свинках.
2.5.3.1. Патологоанатомическая картина у морских свинок.
2.6. Изучение иммуногенных свойств туберкулезной бесклеточной вакцины ТБЦ на молодняке крупного рогатого скота.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
ЛИТЕРАТУРА


М. Авербах с соавт. Для того чтобы иметь ясное представление об иммунологических сдвигах в сенсибилизированном микобактериями туберкулеза макроорганизме, в первую очередь необходимо четко знать химическую структуру, биологические и антигенные свойства отдельных компонентов возбудителя туберкулеза Р. Ю. Романова, В. П. Павлова, . Без этих знаний невозможно создание эффективных вакцин, лишенных балластных белков и жиров и, соответственно, не вызывающих токсических, пирогеиных и аллергических проявлений. Вместе с тем иммунологические исследования, направленные на изучение роли Т и Вклеток при туберкулезе, зависят, в первую очередь, от, наличия активных и специфических антигенов микобактерий туберкулеза. Белки составляют сухой массы микобактерий и могут быть выделены из них воздействием щелочи или экстракцией различными солевыми растворителями М. А. Линникова, З. И. Жукова, , . Несмотря на разнообразный характер белков, получаемых разными исследователями из микобактерий, все они содержали до аминокислот, при высоком содержании основных аминокислот аргинина, гистидина, лизина . Т. , . Белки микобактерий туберкулеза туберкулопротеиды не вызывают поражений в тканях здоровых животных. Туберкулопротеиды оказывают
воздействие на миелоидную, гематопоэтическую систему костного мозга, стимулируют новообразование нейтрофилов, их миграцию из кровеносных сосудов в полости и ткани организма. По данным . ГЗТ. При повторном введении белков микобактерий в организме животных развивается системная анафилаксия или кожная реакция типа Артюса. Соединение туберкулопротеидов и с липополисахаридами или другими компонентами микобактерий вызывает в организме экспериментальных животных развитие состояния ГЗТ. Введение туберкулопротеида, выделенного из цитоплазмы микобактерий в подушечку лапки морской свинки также вызывает развитие ГЗТ С. В сенсибилизированном организме губеркулопротеиды вызывают местные кожные и общие туберкулиновые реакции. Воздействие высокой температуры не влияет на сенсибилизирующую активность туберкулопротеидов, которая может быть нарушена лишь обработкой протеолитическими ферментами. М. . ГЗТ бласттрансформация, торможение миграции макрофагов из капилляров. Вмитогеном стимулирует пролиферацию интактных Влимфоцитов. Наоборот, в случае иммуноспецифической реакции воздействует на сенсибилизированные Тклетки М. М. Авербах с соавт. В последние годы были детально изучены соматические белки микобактерий, выделили из микобактерий пептиды, способные проявить туберкулиновые реакции у специфически сенсибилизированных людей. ТАР из микобактериальных клеток. Было выяснено, что очищенный препарат ТАР содержит азота. Это водорастворимый белок, характеризующийся относительной молекулярной гомогенностью. Введение ТАР морским свинкам не вызывало у них индукции повышенной чувствительности замедленного или анафилактического типа. Вместе с тем ТАР оказался превосходным тестантигеном в кожной туберкулиновой реакции, благодаря высокой активности, сходной с . V. i выделил из микобактерий туберкулопротсид, который обладал сенсибилизирующей активностью, проявлял кожные реакции ГЗТ у сенсибилизированных животных, но не имел защитных свойств. Несмотря на это, при иммунизации кроликов выделенным нуклеопротеидом были получены антитела, которые не давали перекрестных реакций с нуклеопротеидом, выделенным из макроорганизма, стрептококков и кишечной палочки. Данный нуклеопротеид был спефицичен для М. М. vi. Он вызывал выраженные кожные реакции туберкулинового типа у всех исследованных больных первичным туберкулезом, тогда как у вакцинированных туберкулинположительных и туберкулинотрицательных людей кожные пробы с этим нуклеопротеидом были отрицательными. Таким образом, белки микобактерий туберкулеза не вызывают поражений в коже здоровых животных. Повторное введение туберкулопротеидов в здоровый организм вызывает развитие анафилактоидных реакций, а не ГЗТ. Соединение белка с липополисахаридами или введение белков в неполном адъюванте Фрейнда вызывает развитие ГЗТ в организме животных.