Совершенствование методов изготовления и контроля туберкулина очищенного (ППД) для птиц

• Автор: Безгина, Наталья Вячеславовна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 157 с. : ил.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Значение нетуберкулезных микобактерий в инфекционной патологии

1.2 Механизмы развития иммунологического ответа на

микобактериальные антигены

1.3 Совершенствование технологии изготовления

туберкулиновых препаратов

1.3.1 Применение мембранных методов в очистке

белковых препаратов

1.3.2 Современные требования к туберкулиновым

аллергодиагиостикумам

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Материалы, экспериментальные модели и условия экспериментов
2.2. Методы исследований
2.3. Статистическая обработка результатов исследования
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Разработка мембранных методов очистки белков
3.1.1 Оценка возможности мембранного фракционирования
белков туберкулина
3.1.2 Сравнительная оценка режимов микрофильтрации культуральной жидкости М. vi на шихтных
фильтрах марки Ф и керамических мембранах
3.1.3 Отработка условий концентрирования и
диафильтрации протеина с использованием мембранной технологии
3.1.4 Разработка метода стерилизующей фильтрации концентрата туберкулина ППД для птиц
3.2 Анализ выхода белка туберкулина при осаждении его различными концентрациями ТХУ
3.3 Разработка технологии изготовления туберкулина очищенного ППД для птиц в стандартном разведении
3.3.1 Изготовление стандартного раствора туберкулина очищенного ППД для птиц
3.3.2 Оценка стабильности туберкулина очищенного ППД для птиц в стандартном разведении
3.4 Разработка нормативной документации на туберкулин очищенный ППД для птиц в соответствии с требованиями международных нормативных документов
3.4.1 Оценка качественных характеристик туберкулина с использованием методов контроля, предусмотренных международной нормативной документацией
3.4.2 Изготовление и контроль эталонной серии туберкулина очищенного ППД для птиц в соответствии
с международными требованиями
3.4.3 Сравнительное изучение биологических свойств отечественного туберкулина очищенного ППД для птиц в стандартном разведении и туберкулинов зарубежных фирмизготовителей
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ




5
2
2
Список сокращений АПК антигенпредставляющие клетки
ЛТК альттуберкулин Коха
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ВТО Всемирная торговая организация
ГЗТ гиперчувствителыюсть замедленного типа
ГКГС главный комплекс гистосовместимости
ГОСТ . Государственный стандарт ГФ Государственная фармакопея
ЕС Европейский Союз
ЕФ Европейская Фармакопея
ИЛ интерлейкин
ИСО Международная организация по стандартизации
ИФНу гамма интерферон
к Да килодальтон
МЭБ Международное эпизоотическое бюро
Международная единица активности, установленная
согласно международному стандарту НОММ номинально отсекаемая молекулярная масса
ОБТК отдел биологического и технологического контроля
ПД очищенное белковое производное ii i iviv
СТО Стандарт организации
СЭВ Совет экономической взаимопомощи
ТУ технические условия
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФНО фактор некроза опухоли
надлежащая производственная практика
I i Ii ii
1 субпопуляции Тлимфоцитов
подобный рецептор
ВВЕДЕНИЕ


Возросшее в последние десятилетия внимание к проблеме туберкулза сельскохозяйственных животных и людей имеет веское обоснование и связано с целым рядом причин, хотя актуальность данной проблемы всегда оставалась острой для ветеринарных и медицинских специалистов ввиду огромного экономического и социального ущерба, наносимого туберкулзом. В последние годы эпидемическая и эпизоотическая обстановка по туберкулезу обострилась и остатся весьма тревожной , , . Трудности и сложности борьбы с туберкулзом обусловлены многими обстоятельствами, к числу которых относятся структурные и биологические особенности возбудителя, в частности, особый химический состав микробной клетки, обеспечивающий высокую устойчивость бактерий к дезинфицирующим средствам, их способность адаптироваться, изменяться и длительно сохранять жизнеспособность в неблагоприятных условиях обитания. Широкое изучение морфологических, культуральных и биологических свойств микобактерий началось сразу после открытия Р. Кохом возбудителя туберкулза. К настоящему времени получены разносторонние сведения по
морфологии, биохимии и генетике микобактерий, генетической регуляции метаболических процессов. Основными патогенными видами микобактерий, вызывающими туберкулз у животных и человека, являются i i, i vi, i vi , 8. Возбудитель туберкулза долго не был систематизирован и не имел четкого определения. В году Леманн и Найманн отнесли возбудитель туберкулза к роду i. Н.Ф. Гамалея и Штраус изучили морфологические и биологические свойства возбудителя туберкулза птиц и разграничили возбудителей туберкулза птиц и туберкулеза млекопитающих на основании морфологических и культуральных отличий, а также разной патогенности. Микобактерии туберкулза различных видов несколько отличаются друг от друга по своей морфологии. Микобактерии туберкулза птиц имеют форму тонкой, прямой или. Микобактерия характеризуется сильно развитым полиморфизмом. Возбудитель туберкулза птиц не столь избирателен к температурным режимам, как, например М. М. vi 9. М. vi растт при температурах от до С, хотя наиболееблагоприятной для его роста температурой является С. М. vi является аэробным микроорганизмом, не образует никотиновой кислоты, не гидролизует , является пероксидазаотрицатсльным микроорганизмом, синтезирует каталазу, не имеет урсазы или арилсульфатазы и не способен переводить нитраты в нитриты 7. Патогенные микобактерии отличаются от других бактерий наличием в клеточных стенках не только гликопептидолипидов, но и миколовых кислот, что определяет их чрезвычайную устойчивость к воздействию абиотических и биотических факторов. Состав жирных и миколовых кислот медленнорастущих микобактерий в значительной степени подвержен влиянию температурного фактора. При высоких температурах в клеточных стенках микобактерий увеличивается синтез миколовых кислот, повышается и содержание кордфактора. Снижение температуры вызывает уменьшение количества миколовых кислот и кордфактора . Резкое снижение биосинтеза миколовых кислот, а, следовательно, и кордфактора 6,6димиколаттрегалозы, специфического гликолипида патогенных микобактерий, ответственного за кислотоустойчивость и патогенность микобактерий, сопровождается утратой кислотоустойчивости и патогенности у медленнорастущих микобактерий. Исследование популяции микобактерий птичьего вида, у хозяев которых температура тела составляет С, показало, что при данной температуре культура микобактерий развивается очень интенсивно через часов культивирования на мембранных фильтрах, помещнных на среду ЛевенштейнаЙенсена, появляется обильный рост, образующий мощный слоистый покров на поверхности клеток. Культивирование М. С до С существенно не влияет на жизнеспособность популяции, но приводит к временному снижению патогенности, обусловленному значительным уменьшением миколовых кислот и содержания кордфактора. В то же время при 4С покровы на поверхности клеток микобактерий истончались. При этом становилась видна структура популяции, разделнная на отдельные кластеры, в каждом из которых клетки имели определнную ориентацию и находились в ассоциации за счт межклеточного матрикса. Дальнейшее снижение температуры до минус С приводило к значительному нарушению в популяции микобактерий, что характеризовалось деградацией покровов и изменением формы клеток.