Разработка средств диагностики иерсиниоза и дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза

• Автор: Кузьмина, Виктория Борисовна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 225 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Иерсиниоз характеристика заболевания

1.1. Определение болезни, восприимчивость различных видов жи вотных и человека, распространение

1.2. Источник инфекции и пути передачи возбудителя

1.3. Клинические проявления заболевания

1.4. Лечение и профилактика исрсиниоза

1.5. Возбудитель кишечного иерсиниоза, его характеристика

1.5.1. История исследований микроорганизма

1.5.2. Морфолог ия возбудителя

1.5.3. Влияние температурного фактора на рост иерсиний
1.5.4. Культуральные и тинкториальные свойства
1.5.5. Чувствительность .ii к дезосредствам, антибио тикам, бактериофагам
1.5.6. Вирулентные свойства возбудителя иерсиниоза
1.5.7. Биохимические свойства, классификация по биоварам
1.5.8. Антигенное строение .ii, классификация по се роварам
1.5.9. Антигенные связи .ii
1.5 Антигенные связи .ii серовара и
л
1.6. Антигенная структура
1.7. Диагностика иерсиниоза
1.8. Диагностика бруцеллза
1.8.1. Серологическая диагностика бруцеллза животных
1.9. Дифференциальная диагностика иерсиниоза, вызванного ii ii серовара , и бруцеллза
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. Материалы и методы
3. Результаты исследований
3.1. Изучение культуральноморфологических, биохимических и тинкториальных свойств штаммов иерсиний
3.1.1. Культуральные свойства эталонных штаммов иерсиний
3.1.2. Морфология иерсиний в , и формах
3.1.2.1. Морфология колоний
3.1.2.2. Морфология культуры в окрашенных мазках под световым микроскопом
3.1.3. Биохимические свойства иерсиний
3.2. Селекция культур иерсиний различных сероваров в и форме
3.3. Изучение влияния температуры выращивания и питательной среды на диссоциацию кишечных иерсиний
3.4. Изучение влияния влажносги питательной среды на диссо циацию кишечных иерсиний
3.5. Изучение свойств культур ii ii в и форме
3.5.1. Изучение биохимических свойств иерсиний, находящих ся в и форме
3.5.2. Электрофоретическое исследование иерсиний в и форме
3.6. Определение вирулентности референтных штаммов ii ii
3.7. Получение иерсиниозных гипериммунных сывороток
3.7.1. Разработка методики получения гипериммунных кро личьих сывороток на антигены и сероваров в и форме
3.7.2. Разработка метода получения гипериммунных кроличьих сывороток против различных сероваров иерсиний в форме
3.7.3. Получение гипериммунных сывороток крупного рогатого 4 скота
3.8. Антигенные связи кишечных иерсиний
3.8. Антигенные связи кишечных иерсиний
3.8.1. Антигенные связи различных сероваров иерсиний
3.8.2. Антигенные связи иерсиний в 8 и И форме
3.9. Серологическая диагностика иерсиниоза
3.9.1. Оптимизация условии постановки пробирочной РА при иер 1 синиозс
3.9.1.1. Реакция агглютинации с иерсиниозными антигенами в 1 8 форме
1. Подбор антигенов
2. Определение оптимальной концентрации антигена
3. Определение оптимального раствора
3.9.1.2. Реакция агглютинации с иерсиниозными антигенами в 6 Я форме
3.9.2. Определение возможности применения метода иммуноб 7 лоттинга для серологической диагностики иерсиниоза
3.9.2.1. Сравнительное изучение антигенной структуры рефе 8 рентных штаммов иерсиний различных сероваров
3.9.2.2. Сравнительное изучение антигенной структуры иереи 9 ний в Б и Я форме
3.9.3. Применение метода иммуноферментного анализа для диаг 0 ностики и дифференциальной диагностики иерсиниоза
3.9.3.1. Подбор антигена
1. Определение концентрации антигена
2. Выбор иерсиниозного антигена для реакции
3. Проверка активности антигенов из ссровара , изго 4 товленных различными способами
4. Проверка специфичности 8Яантигена, изготовленного 5 из серовара
5. Проверка пригодности различных серий антигена бру 6 целлзного единого для РА. РСК, РДСК, изготовленного биофабричным способом, в качестве бруцеллзного антигена для ИФА
6. Проверка специфичности Антигена бруцеллзного 6 единого для РА. РСК, РДСК в ИФА
3.9.3.2. Влияние продолжительности инкубации антигена на 7 адсорбцию на полистироле
3.9.3.3. Влияние буферного раствора на качество реакции
3.9.3.4. Влияние концентрации Твина на чувствительность 9 реакции
3.9.3.5. Влияние температурного режима инкубации сывороток 0 и конъюгатов на результаты их титрования
3.9.3.6. Конструирование Набора для выявления антител к иер 1 синиям и бруцеллам в сыворотках крови крупного рогатого скота методом ИФА
3.9.3.7. Пригодность разработанной тестсистемы для целей выявле 3
ния бруцеллзных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота
3.9.3.8. Пригодность Набора для выявления иерсиниозных ан 6
3.9.4. Сравнительная оценка результатов РА и ИФА
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Бактерии в подобных колониях полиморфны от неправильных палочковидных до шаровидных и различной величины . В сканирующем электронном микроскопе было выявлено, что в Яформах колоний большинство клеток находится в стадии гетероморфизма, свойственного Ьтрансформации клеток . При косом освещении у колоний в Бформе наблюдается довольно ярксе свечение, в то время как у колоний в Кформс оно полностью отсутствует или интенсивность очень низка 2. Клетки в составе колоний секретируют внеклеточные вещества, часть из этих веществ в сканирующем электронном микроскопе выявляется как покров на поверхности колонии. Покровы выявлены у всех видов иерсиний. Элементы покрова на ультратонких срезах выявляются как ассоциативная связь посредством тонких беспорядочно расположенных нитей. Электронномикроскопическими исследованиями установлена полисахаридная природа покровов . Иерсинии исихрофильные микроорганизмы, размножаются в широком температурном диапазоне от 0 до плюс С. Эго свойство обеспечило
им возможность повсеместного распространения . Выживаемость микроорганизма при плюс С зависит от экспозиции температурного воздействия . Нагреванием иереиний при С установлено, что на протяжении минут количество живых клеток уменьшается в раз, причм кишечные иерсинии являются самыми устойчивыми к воздействию температуры из всех представителей рода ii , . Подвижны при температуре С и неподвижны при С. Оптимальной температурой для роста считают плюс С 1. В условиях пониженной температуры плюс С накопление культуры происходит медленно. Способность иерсиний расти при 0С благоприятствует размножению их в пищевых продуктах, хранящихся в холодильнике, а также они сохраняются длительное время в замороженных продуктах. Температура выращивания оказывает влияние на размеры клеток, скорость размножения и, по данным i 6 для иерсиний характерно изменение белкового состава клеточной стенки в зависимости от температуры выращивания. Известно, что температурный фактор является одним из важных физических факторов внешней среды, влияющим на микроорганизмы. Под воздействием этого фактора у бактерий изменяется обмен веществ, что может влиять на их вирулентность, антигенность, диссоциацию, биохимическую активность. С переходить в форму. Низкие температуры стабилизируют и длительно удерживают культуру бактерий в форме 6а. В литературе имеются данные о температурной зависимости экспрессии протеинов наружной мембраны, связанных с плазмидой вирулентности 3, 4, 1. Снижение вирулентности у культур, выращенных при С описано рядом авторов 4, 3. Экспериментами по изучению роли покровов иерсиний при воздействии неблагоприятных факторов установлено, что при температуре С
асимптомное течение и носительство возбудителя не только кишечное, но и глоточное . Вместе с тем, при экспериментальном заражении сельскохозяйственных животных культурой У. ШегосоШюа, редко удается вызвать клиническое проявление болезни 2. Однако, проведнные Г. Я.Ценвой с соавт. Инфекционный процесс обычно протекает генерализован но с диссеминацией возбудителя в органы и ткани. Оральное экспериментальное заражение нетелей через две недели приводило к значительному увеличению абсолютного количества лейкоцитов с одновременным уменьшением процента лимфоцитов и увеличением количества нейтрофилов со сдвигом ядра влево до юных. После внутривенной инокуляции через 7 дней наблюдали резкое снижение абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитопению, при умеренной нейтрофилии со сдвигом ядра влево до юных и эозинофилии. Лишь через 0 дней показатели крови животных приходили в норму 4. Однако заражение животных иерсиниями серовара приводило к развитию только энтероколита и мезаденита, т. При исследовании лимфоузлов, удалнных по поводу иерсиниозного мезаденита и , описаны в основном гиперцластические изменения 0. У коров отмечали нарушение обмена веществ, сопровождающиеся высыпаниями на кожных покровах, дерматитами, повышением температуры тела, или диареей. Могут возникнуть маститы иерсиниозной этиологии, аборты, нарушение оплодотворяем ости, вследствие чего яловость 9, 0. Н. ЫаЦегтапп с соавт.