Разработка и усовершенствование средств и методов лабораторной диагностики оспы овец и оспы коз

• Автор: Машнин, Александр Валентинович
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 149 с. : ил

Более того, способность близкородственного ВКПД и ряда других вирусов, вы зывать заболевания с клинически сходной картиной требует развития чувствительных, специфичных и экспрессных методов дифференциальной диагностики. Одним из перспективных направлений в диагностике инфекций, в том числе особо опасных вирусных болезней мелких жвачных, являются методы ИФЛ на основе моноклональных антител МА, широко применяемые з лабораторной практике , . Таким образом, указанные выше причины обусловливают актуальность разработки современных средств и методов лабораторной диагностики оспы овец и оспы коз на основе МА. Целью данной работы является разработка средств и методов лабора
торной диагностики оспы овец и оспы коз на основе моноклональных антител. ВООиОК культуры клеток и отработать оптимальные условия получения, концентрирования и очистки специфических антигенов данных возбудителей. ВООиОК. МА. Определены чувствительные к ВООиОК культуры клеток. Отработаны методы получения антигенов, пригодных как для иммунизации животных, так и использования в качестве составляющего компонента диагностического набора. Получены клонов гибридных клеток, стабильно секретируюших моноклональные антитела к антигенным детерминантам, расположенным на полипептидах В, штамм ИСХГ. Установлено, что антигенные детерминанты, распознаваемые моноклональными антителами клонов 0. ВООиОК с молекулярной массой кД и отсутствуют антигеннородственных и гетерологичных вирусов болезней мелких жвачных. На основе моноклональных антител клона 0 2 разработай прямой метод гистохимического иммунофермеитного анализа ГХ ИФА. ВООиОК в инфицированном вируссодержащем материале в титре от ТЦДзосм1. Разработан сэндвич метод твердофазного иммунофермеитного анализа на основе моноклональных антител, позволяющий обнаруживать антигены ВООиОК в титре 2 в ной суспензии кожи с прилегающей подкожной клетчаткой, отобранной с мест оспенного поражения, и в титре в ной суспензии хоан инфицированных животных. При этом метод позволяет дифференцировать данные инфекции от других болезней мелких жвачных, протекающих со схожей клинической картиной. Разработан метод двухфазного ингибирования твердофазного иммуноферментного анализа на основе моноклональных антител клона . ВООиОК и дифференцировать их от гетеролог имиых антител. В результате проведенных исследований разработаны экспрессные, чувствительные, специфичные методы диагностики и ОК. Разработан Набор препаратов для диагностики оспы овец и коз твердофазным иммуноферментным анализом на основе моноклональных антител и оформлена соответствующая нормативнотехническая документация Временная инструкция по изготовлению и контролю. Технические условия. Наставление по применению Набора утвержденная директором ВНИИВВиМ. Материалы диссертации доложены на научной конференции молодых ученых ВНИТИБП г. Щелково и на заседаниях ученого совета ВНИИВВиМ г. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ. Определение оптимальных условии получения, концентрирования и очистки специфических антигенов ВООиОК. Результаты экспериментов по получению линий гибридом, стабильно продуцирующих моноклональные антитела, специфичные к антигенам ВООиОК. Результаты экспериментов по усовершенствованию метода получения активных гипериммунных сывороток. Разработка тестсистем на основе иммунофермеитного анализа для диагностики оспы овен и оспы коз. Апробация разработанных методов лабораторной диагностики оспы овен и оспы коз. Диссертация изложена на 1 листе машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы 4 источника, в том числе отечественных. Работа иллюстрирована таблицами, рисунками и дополнена приложениями. Отдельные этапы экспериментальных работ выполнены совместно с к. Новиковой М. Б. к. Срижаковой О. М. к. Балашовым В. М. к. Горшковой Т. Ф. д. Середой А. Д. к. Власовой к. Неверовской I ГС. Искреннюю благодарность автор приносит коллективу лаборатории Диагностики за оказанную помощь при выполнении данной работы. Автор благодарит д. Куриинова В. В., д. Цыбанова С. Ж., к. Южук Т. Э. и к. Новикова Б. В. ВНИИВВиМ за полученные консультации.