Разработка и совершенствование экспресс-методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак

• Автор: Урюмцева, Татьяна Игоревна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Павлодар
• Количество страниц: 112 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика и распространение инфекционного гепатита

собак

1.2. Сведения о возбудителе болезни

1.3. Методы диагностики инфекционного гепатита собак

1.4. Методы экспрессной диагностики инфекционных болезней

1.5. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Вирусы и вируссодержащие материалы

2.1.2. Животные и культуры клеток
2.1.3. Антисыворотки
2.1.4. Реактивы и препараты
2.1.5. Растворы химических веществ
2.1.6. Отбор и подготовка проб испытуемого материала
2.1.7. Выделение иммуноглобулинов и определение концентрации белка
2.1.8. Методы серологических исследований
2.1.9. Статистическая обработка результатов исследований
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Изучение возможности применения средств и методов
диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота при инфекционном гепатите собак
2.2.2 Получение иммунных сывороток при инфекционном гепатите
собак, определение их серологической активности и выделение иммуноглобулиновой фракции
2.2.3. Отработка условий приготовления антительного иммуносорбента и его использования при обнаружении антигена вируса инфекционного гепатита собак
2.2.4. Выбор системы культивирования вируса инфекционного
гепатита собак с целью получения диагностического антигена
2.2.5. Отработка условий приготовления антигенного иммуносорбента и его использования при обнаружении специфических антител
2.2.6. Изучение диагностической ценности разработанных методов
диагностики инфекционного гепатита собак
3. ОБСУЖДЕНИЕ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ 5
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
А ЕМ Атомные единицы массы АН Антиген нормальный АС Антиген специфический
Уего Перевиваемая культура клеток почки африканской зелной мартышки
ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота
ЕД Единица действия
С Иммуноглобулин класса в
М Иммуноглобулин класса М
ИГС Инфекционный гепатит собак
ИФА Иммуноферментный анализ
И ЭМ Иммуноэлектронная микроскопия
КББ Карбонатбикарбонатный буфер
КРС Крупный рогатый скот
КС Комплементсвязывающие антиген или антитело Десятичный логарифм
МБВК Перевиваемая культура клеток почки телнка МПСК Перевиваемая культура клеток почки собаки МФА Метод флюоресцирующих антител ПЭГ Полиэтиленгликоль
НМФА Непрямой метод флуоресцирующих антител РАЛ Реакция агглютинации латекса РАМ Реакция агглютинации микродисперсии РГА Реакция гемагглютинации
РДП Реакция диффузионной преципитации в агаровом геле
Реакция нейтрализации
РНГА Реакция непрямой гемагглютинации
РНК Рибонуклеиновая кислота
РСК Реакция связывания комплемента
РТАЛ Реакция торможения агглютинации латекса
РФМ Резорцинформальдегидная микродисперсия
СПЭВ Перевиваемая культура клеток почки эмбриона свиньи
ТЦД Тканевая цитопатическая доза
ФБР Фосфатнонатриевый буфер
ФБС Фосфатнобуферный солевой раствор
ЦПД Цитопатическое действие
КФ культура клеток фибробластов куриных эмбрионов ВНК перевиваемая культура клеток почки сирийского хомячка
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


В результате диагноз может быть поставлен неверный и, как следствие, меры борьбы с заболеванием оказываются неэффективными Е. Данилов, А. Майоров, В. Чижов, , Ж. П. Самэй, . Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена изза изменчивых и малохарактерных признаков заболеваний. В практических условиях предварительный диагноз на инфекционный гепатит ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Окончательный диагноз ставят при получении положительного
заражения собак, песцов или серебристочерных лисиц вируссодержащим материалом от павших зверей с признаками гепатита. Предложенные в настоящее время такие методы лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак, как РСК, ИФА и РНГА требуют относительно длительного времени, а также особых условий постановки Ж. Котард, , А. Монаенков, . Практически единственным методом диагностики инфекционного гепатита собак, применимым в условиях ветеринарных лабораторий, является гистологический метод обнаружения специфических телецвключений в клетках печени. Однако, с внедрением в практику живых вирусвакцин против этого заболевания было установлено, что вакцинный вирус также вызывает образование аналогичных телецвключений. Дифференцировать поствакцинальные тельцавключения от постинфекционных стало практически невозможным. Кроме того, этот метод применим только для посмертной диагностики заболевания. В связи с этим, разработка и совершенствование специфических средств и методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак, применимых в ветеринарной практике, является весьма актуальной проблемой. Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, целью наших исследований разработка и внедрение простых, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью методов диагностики инфекционного гепатита собак. Усовершенствовать методы приготовления диагностических препаратов антигенов и иммуноглобулинов при ИГС. Определить диагностическую ценность разработанных средств и методов диагностики инфекционного гепатита собак. Научная новизна. В сравнительном аспекте изучена чувствительность различных перевиваемых культур клеток к вирусу инфекционного гепатита собак. Установлено, что перевиваемая культура клеток МОСК. Определены технологические аспекты приготовления культурального антигена вируса ИГС. На основе полученного антигена отработана схема приготовления диагностической сыворотки при инфекционном гепатите плотоядных и выделения из не иммуноглобулиновой фракции. Новизна исследований подтверждена положительным решением о выдаче предварительного патента на изобретение Способ экспрессдиагностики инфекционного гепатита плотоядных животных. Практическая значимость работы. Разработаны схемы приготовления диагностического культурального антигена вируса инфекционного гепатита собак и диагностической сыворотки при этом заболевании. Для прижизненной и посмертной диагностики инфекционного гепатита собак предложены экспрессные методы обнаружения антигена вируса в пробах патологического материала и антител в сыворотках крови больных и переболевших животных, которые прошли апробацию с положительным результатом в ветеринарных клиниках гг. Семипалатинска и Павлодара. Апробация полученных результатов. НИИ прикладной биотехнологии Павлодарского университета годы, Первом Международном ветеринарном конгрессе, Алматы, г. Павлодар, . Публикация результатов исследований. По материалам исследований опубликовано 6 научных работ, в том числе один предварительный патент на изобретение. Внедрение результатов исследования. По результатам проведнных исследований в Патентном ведомстве Республики Казахстан получен Предварительный патент на Способ экспрессдиагностики инфекционного гепатита собак заявка . Разработанные методы диагностики прошли апробацию с положительным результатом в ветеринарных клиниках гг. Семипалатинска Лидия от ноября г. Аида от декабря г. Павлодара Сталкер от марта г Результаты, полученные в ходе выполнения работы используются в учебном процессе Павлодарского университета акт 6 от марта г.