Разработка иммуноферментных тест-систем для определения антител к бактериям рода Salmonella серогрупп B,C и D в сыворотках крови свиней и кур

• Автор: Капускина, Юлия Викторовна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 123 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Возбудитель сальмонеллеза

1.1.1. История открытия возбудителя и его таксономическое

положение.

1.1.2. Морфология возбудителя и типкториальные свойства

1.1.3. Биохимические свойства

1.1.4. Антигенная структура сальмонелл.

1.1.5. Эпизоотология сальмонеллеза и клинические признаки

заболевания.

1.1.6. Иммунитет и специфическая профилактика

1.2. Методы диагностики сальмонеллеза.

1.2.1. Бактериологический анализ
1.2.2. Серологические методы
1.3. Иммунофсрмситный анализ
1.3.1. Сущность, принципы, практическое применение
1.3.2. Применение ИФА для обнаружения антител к сальмонеллам
1.4. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы
2.1.1. Штаммы.
2.1.2. Питательные среды
2.1.3. Животные.
2.1.4. Антигены.
2.1.5. Сыворотки
2.1.6. Растворы и реактивы
2.2. Методы.
2.2.1. Культивирование бактерий.
2.2.2. Получение бактериальных антигенов
2.2.3. Определение активности сывороток в количественной РА.
2.2.4. Постановка непрямого твердофазного варианта ИФА для выявления
антител к бактериям рода
2.2.5. Получение нормальных сывороток крови свиней и кур.
2.2.6. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Получение специфических сывороток крови.
3.2. Изучение активности и специфичности препаратов различных антигенов . ii, iii и . ii в ИФА.
3.3. Разработка иммунофсрмситных тестсистем на основе липополисахаридпых антигенов для определения антител к некоторым серовариаитам .
3.3.1. Определение оптимальных разведений антигена.
3.3.2. Оптимизация условий постановки непрямого варианта ИФА.
3.3.3. Получение комбинированных липополисахаридпых антигенов
3.4. Разработка иммунофсрмситных тестсистем для определения антител
к бактериям рода при тестировании сывороток крови кур и
свиней в одном разведении
3.4.1. Определение титра антител к антигенам в сыворотках крови кур и свиней.
3.4.2. Определение позитивнонегативного порога
3.4.3. Выбор допустимых значений ОГ1 контрольных сывороток
3.5. Сравнение чувствительности и специфичности разработанных иммунофсрмситных тестсистем с коммерческими наборами ИФА и
РА.
3.6. Проведение серологических исследований евино и птнцепоголовья для выявления специфических антител к сальмонеллам с применением разработанных иммунофсрмситных тестснсгсм.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РУЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ.
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


По данным многих авторов, самыми распространенными источниками сальмонелл для человека являются продукты убоя птицы, яйца, а также мясо животных, в первую очередь, свинина , , , 9, 2, 0, 2. В настоящее время серовариантами сальмонелл, наиболее часто выделяемыми от свиней, являются i . С и В, соответственно, от кур iii . Сальмонеллез распространен во многих странах мира, в том числе и в России 2, 9, , , 0. По данным Департамента ветеринарии РФ, в последнее десятилетие увеличилось число неблагополучных пунктов по сальмонеллезу. Широкому распространению данного заболевания способствует рост числа случаев субклинических и латентных форм инфекции, различные пути заражения, а также увеличение количества штаммов, формирующихся под влиянием антибиотиков и химиопрепаратов. Кроме этого, сальмонеллы длительно переживают и размножаются в почве, трупах животных и фекалиях , , . По данным ряда авторов увеличение циркуляции возбудителя связано, прежде всего, с несовершенством прижизненной диагностики заболевания 9, 3, 8. В настоящее время в большинстве развитых стран разрабатываются национальные программы, направленные на улучшение ситуации по заболеваниям, вызываемым сальмонеллами, включающие своевременную и качественную диагностику. Основу программ но ликвидации сальмонеллеза составляет выявление инфицированных животных , , 6, 5. Для этой цели Международное эпизоотическое бюро МЭБ рекомендует использовать серологические тесты. В исследованиях используют традиционные методы, к которым относятся реакция агглютинации РА реакция непрямой гем агглютинации РНГА и реакция связывания комплемента РСК. Однако эти методы отличаются трудоемкостью и субъективностью в интерпретации результатов. В связи с этим в настоящее время широкое распространение при выявлении антител к бактериям рода получил иммуноферментный анализ ИФА 0, 7, 4. Некоторые зарубежные фирмы i, ШЕХХ, i и др. Однако их массовое применение в нашей стране ограничено высокой стоимостью. Тем не менее, иммуноферментные наборы на основе комбинированных антигенов являются более экономичными при проведении мониторинга в сравнении с наборами, в настоящее время используемыми в России, которые способны выявлять антитела только к одному из серовариантов бактерий . Таким образом, создание качественных и доступных по цене отечественных иммуноферментных тестсистем на основе комбинированного антигена для мониторинга сальмонеллеза животных является актуальной задачей. Целью исследований была разработка иммуноферментных тестсистем для выявления антител к бактериям рода серогрупп В, С и в сыворотках крови свиней и кур при тестировании в одном разведении. Российской Федерации и проанализировать полученные данные. Впервые в России разработаны иммуноферментные тестсистемы на основе комбинированного антигена для выявления специфических антител в сыворотках крови к наиболее значимым серовариангам бактерий рода для свиней и кур. При этом получены специфические компоненты сальмонелл, установлены величины пороговых показателей, разграничивающих специфическую положительную и неспецифическую отрицательную реакции, определена величина разведения сыворотки, показатель которой будет использован для вычисления ее титра, построены уравнения связи между показателем Р фиксируемого разведения и величиной титра сыворотки для расчета титра антител при тестировании проб в одном разведении. Проведен анализ данных ИФА, полученных при серологическом исследовании евино и птицепоголовья с использованием разработанных тестсистем. Методические рекомендации по получению липополисахаридного антигена бактерий i i i серовариант iii для иммуноферментного анализа г. Инструкция по применению набора для выявления антител к бактериям рода серогрупп В и С в сыворотках крови свиней иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении март г. Апробация работы Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на Международной научнопрактической конференции молодых ученых Достижения молодых ученых в ветеринарную практику апреля г. Владимир, и на заседаниях ученого совета ФГУ ВНИИЗЖ в гг. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, из них одна статья в издании по перечню ВАК.