Полимеразная цепная реакция при диагностике лептоспироза и изучение органотропности лептоспир у сельскохозяйственных животных

• Автор: Викторова, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 ГЛАВА 1. КРАТКАЯ ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА

ГЛАВА 2. СИСТЕМАТИКА И НОМЕНКЛАТУРА ЛЕПТОСПИР

2.1. Дифференциация патогенных и сапрофитных лептоспир

ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛЕПТОСПИР

3.1. Морфология лептоспир

3.2. Физиология лептоспир

3.3. Патогенность лептоспир

ГЛАВА 4. ПАТОГЕНЕЗ ЛЕПТОСПИРОЗА

ГЛАВА 5. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ
ГЛАВА 6. ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕ1ШНИЯ
ГЛАВА 7. ЛОКАЛИЗАЦИЯ ЛЕПТОСПИР В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ
ГЛАВА 8. ДИАГНОСТИКА ЛЕПТОСПИРОЗА
8.1. Микроскопия
8.2. Выделение культур
8.3. Биопроба
8.4. Серологический метод
8.5. Молекулярногенетические методы
ГЛАВА 9. ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
9.1. Преимущества метода ПНР
9.2. Ограничения метода ПНР
9.3. Применение ПНР при диагностике инфекционных болезней
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ПОЛУЧЕННЫЕ
РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА . МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА . СОЗДАНИЕ ТЕСТСИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР МЕТОДОМ ПЦР
Л. Определение универсальности праймеров
.2. Оптимизация условий ПЦР
.3. Определение чувствительности тестсистемы
ГЛАВА . ОЦЕНКА ПРИГОДНОСТИ ТЕСТСИСТЕМЫ ПЦР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР
.1. Оценка специфичности тестсистемы для выявления патогенных лептоспир
.2. Сравнение метода ПНР с бактериологическим и серологическим методами
.3. Обнаружение лептоспир в патологическом материале
.4. Сравнение различных методов диагностики при исследовании крови и мочи зараженных лептоспирами животных
ГЛАВА . ОЦЕНКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ВАКЦИНИРОВАННЫХ И ИНФИЦИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ
ГЛАВА . ИЗУЧЕНИЕ ОРГАНОТРОПНОСТИ ЛЕПТОСПИР
.1. Изучение органотропности лептоспир у золотистых хомячков
.2. Изучение органотропности лептоспир у крупного рогатого скота
.3. Изучение органотропности лептоспир у свиней
.4. Изучение распространения лептоспир в органах убойного крупного рогатого скота
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ


РМА является и чувствительной и специфичной, однако остается весьма трудоемкой в постановке, требует поддержания и использования живых культур лептоспир. Бактериологический и гистологический методы в нашей стране практически не используются изза ряда объективных и субъективных причин, в том числе и изза низкой чувствительности. Учитывая то, что своевременная постановка диагноза позволяет успешно бороться с заболеванием, необходимо найти методы диагностики, более эффективные по сравнению с используемыми. Лептоспиры, в отличие от большинства микроорганизмов других видов, трудно культивируются на питательных средах. Микроскопия является недостаточно чувствительным методом. Она позволяет обнаруживать лептоспиры, когда их количество составляет сотни тысяч микробных клеток в см3. При использовании реакции микроагглютинации РМА необходимо повторное исследование сыворотки крови с целью выявления нарастания титра антител. К тому же РМА не позволяет дифференцировать вакцинированных животных от инфицированных и выявлять лептоспироносителей, в сыворотке крови которых специфические антитела могут отсутствовать. К числу недостаточно изученных вопросов при лептоспирозе относится органотропность лептоспир, т. Эти вопросы не представляется возможным решить бактериологическим или серологическим методами. Для совершенствования диагностики необходимы новые более чувствительные методы. Одним из таких методов является полимеразная цепная реакция ПЦР, обладающая высокой специфичностью и чувствительностью. Целыо работы является создание тестсистемы для диагностики лептоспироза животных методом ПЦР, изучение возможности ее использования для выявления животныхлептоспироносителей, изучения патогенеза заболевания. Создать тестсистему ПЦР для обнаружения патогенных лептоспир. Изучить специфичность тестсистемы, ее способность обнаруживать ДНК лептоспир в различном патологическом материале,
полученном от животных кровь, моча, абортированный плод, кусочки органов и тканей и т. Провести сравнительную оценку полимеразной цепной реакции с традиционными методами обнаружения лептоспир. Разработать нормативную документацию на тестсистему. Изучить распространенность лептоспир в органах и тканях убойного крупного рогатого скота. Научная новизна. Практическая значимость работы. Разработана тестсистема для обнаружения патогенных лептоспир с помощью полимеразной цепной реакции совместно с НПО Нарвак. ТУ Тестсистема для обнаружения патогенных лептоспир методом ПЦР 2, утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ июля г. Инструкция по применению Тестсистемы для обнаружения патогенных лептоспир методом ПЦР, утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ марта г. Тестсистема выпускается для практического применения, используется в ветеринарных диагностических лабораториях для постановки или подтверждения диагноза на лептоспироз. Подготовлен к согласованию в Россельхознадзоре проект Инструкции по борьбе с лептоспирозом животных, в которой метод ПЦР предложен, как один из методов диагностики лептоспироза. Апробация работы. Всероссийской научной конференции Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, посвященной летию ВГНКИ, Москва, г. X Московском международном ветеринарном конгрессе, Москва, г. IX Всероссийской конференции по лептоспирозу, Анапа, г. Межлабораторном совещании по рассмотрению диссертационной работы в ФГУ ВГНКИ, Москва, г. Всероссийской научной конференции Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, посвященной летию ФГУ ВГНКИ, Москва, г. Экспериментальные материалы, представленные в диссертации, получены как лично автором, так и в соавторстве с сотрудниками НПО Нарвак. На защиту выносится
1. Обоснование применения метода полимеразной цепной реакции для диагностики лептоспироза. Результаты изучения сроков обнаружения и органотропности лептоспир в организме экспериментально зараженных лабораторных и сельскохозяйственных животных. Результаты изучения распространенности лептоспир в органах и тканях убойного крупного рогатого скота.