Полиакриловая кислота как адъювант в противоящурной вакцине

• Автор: Клюкина, Надежда Дмитриевна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 127 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика ящура и его возбудителя

1.2. История производства противоящурных вакцин

1.3. Технология приготовления противоящурной вакцины

1.3.1. Размножение и культивирование вируса ящура

1.3.2. Очистка и концентрирование вируса ящура

1.3.3. Инактивация инфекционности вируса ящура

1.4. Адъюванты в противоящурной вакцине

1.4.1. Адъюванты в сорбированных вакцинах

1.4.2. Масляные адъюванты
1.4.3. Синтетические адъюванты
1.5. Механизмы действия адъювантов
1.6. Иммунитет при ящуре
1.7. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Вирусы
2.1.2. Животные
2.1.3. Культуры клеток
2.1.4. Аппаратура
2.1.5. Адъюванты
2.1.6. Растворы и реактивы
2.1.7. Определение токсичности препаратов
2.1.8. Очистка вирусной суспензии
2.1.9. Определение титра инфекционности вируса
2.1 Инактивация инфекционности вируса
2.1 Определение авирулентности препаратов
2.1 Концентрирование антигена
2.1 Количественное определение вирусного белка
2.1 Реакция нейтрализации
2.1 Изготовление сорбированных вакцин
2.1 Изготовление эмульсионных вакцин
2.1 Контроль иммуногенности вакцин
2.1 Определение стерильности антигена
2.1 Определение реактогенности препаратов
2.1 Статистическая обработка результатов исследования
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Адъюванты в протнвоящурных вакцинах
2.2.2. Изучение токсических свойств полиакриловой кислоты и ее сополимеров
2.2.2.1. Изучение реактогенных свойств ПАК на лабораторных и сельскохозяйственных животных
2.2.3. Изучение адъювантной активности ПАК и сополимеров ПАК на лабораторных животных
2.2.4. Изучение иммуногенной активности вакцин с синтетическими адъювантами
2.2.4.1. Изучение иммуногенной активности вакцин с ПАК на КРС
2.2.4.2. Изучение иммуногенной активности вакцин с ПАК на свиньях
2.2.5. Отработка условий концентрирования вируса ящура с помощью метода сорбцииэлюции
2.2.5.1. Определение оптимальной концентрации ГОА для проведения сорбции
2.2.5.2. Отработка техники элюции
2.2.6. Концентрирование вируса ящура для изготовления вакцин методом сорбцииэлюции
2.2.6.1. Изучение иммуногенной активности протнвоящурных вакцин, приготовленных из концентратов, полученных методом сорбцииэлюции с ПАК и ее сополимерами, на КРС
2.2.6.2. Изучение иммуногенной активности эмульсионных противоящурных вакцин, приготовленных из концентратов, полученных методом сорбцииэлюции с ПАК и ее сополимерами, на свиньях
2.2.7. Изучение сохраняемости концентратов, приготовленных методом сорбцииэлюции
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВНК перевиваемая клеточная культура почки хомячка
ФБР фосфатнобуферный раствор
АЭЭИ аминоэтилэтиленимин
СП культура клеток свиной почки
ВНИИЗЖВсероссийский научноисследовательский институт защиты животных
ГОА гидроокись алюминия
КРС крупный рогатый скот
ВНА вируснейтрализующие антитела
РСК реакция связывания комплемента
ЛД пятидесятипроцентная летальная доза
ИД пятидесятипроцентная инфекционная доза
ИМД пятидесятипроцентная иммунизирующая доза
ИмДздМ пятидесятипроцентная иммунизирующая доза для взрослых мышей ИмДздМС пятидесятипроцентная иммунизирующая доза для морских свинок ТЦД пятидесятипроцентная цитопатическая доза
ТД пятидесятипроцентная токсическая доза
ПАК полиакриловая кислота
Мм молекулярная масса
ПВПД поливинилпирролидон
показатель концентрации водородных ионов
ЦПД цитопатическое действие
ТУ технические условия
I масляный адъювант фирмы Сеппик, Франция
КВЯ культуральный вирус ящура
ПД пятидесятипроцентная протективная доза
ДПВ дни после вакцинации
ВЯ вирус ящура
ПЗБ Покровский завод биопрепаратов
мелкий рогатый скот
ГД пятидесятипроцентная генерализационная доза.
I
ВВЕДЕНИЕ


Международный опыт профилактики ящура показывает, что осуществление только ветеринарносанитарных мер не гарантирует защиту от распространения заболевания. Так, появление ящура типа О паназиатского штамма в г. Тайване и дальнейшее его распространение в Южной Корее, Японии г. Великобритании, Франции и Нидерландах г. Ликвидация болезни с использованием метода убоя уничтожения заражнных стад дает положительные результаты в том случае, если источник ограничен и обеспечена ранняя диагностика. При запоздалой диагностике в Великобритании и Тайване уничтожение по 4 млн. На Тайване заболевание было ликвидировано только с использованием вакцин . По данным МЭБ, ежегодно неблагополучными по ящуру считается стран. В гг. Были идентифицированы все 7 известных типов вируса ящура, но преобладающими являлись типы О и А. В комплексе мер борьбы с таким особо опасным заболеванием парнокопытных животных, как ящур, основное место отводится вакцинации, которая обеспечивает иммунитет в популяции восприимчивых животных . Считается, что лучшими вакцинами для крупного и мелкого рогатого скота являются сорбированные вакцины с сапонином, которые неэффективны для свиней . Наиболее эффективными для свиней являются эмульсионные вакцины, которые также могут быть эффективными для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота. Однако, эмульсионные вакцины типа водамасло при вакцинации крупного и мелкого рогатого скота часто дают тяжелые поражения в местах введения вакцин, а при многократном применении аллергические реакции. Н.С. Мамков установил, что причиной появления нежелательных реакций у животных являются качество и свойства масляных адъювантов. Различные адъюванты и механизм их действия описаны многими учеными ,,,,,,,, , , ,, ,. Первым адъювантом в противоящурной вакцине был гидрат окиси алюминия, примененный Шмидтом и сотр. Вальдман и Кбе 5, Пиль 9 показали роль химической структуры и адсорбционной активности ГОА в иммуногенной активности вакцин. Эспине 0 и Риверсон 3 ввели сапонин в качестве адъюванта в противоящурные вакцины. Исследованиями ряда авторов было показано, что выраженным адъювантным действием обладают различные полиэлектролиты , , , , ,3, 8 при изготовлении различных вакцин. Р.В. Петров и Хаитов отметили свойство высокомолекулярных соединений полианионов и поликатионов стимулировать иммунный ответ у животных. Такие адъюванты индуцируют Тнезависимый ответ и позволяют обойти генетический контроль иммунного ответа. Д.В. Михалишин применял полиакриловую кислоту ПАК как адъювант в составе сорбированной противоящурной вакцине и в качестве отдельного адъюванта. В своих исследованиях он показал, что ПАК усиливает иммунный ответ и эффективна при применении в качестве адъюванта при производстве противоящурных вакцин для иммунизации крупного рогатого скота . Однако при этом не были проведены исследования иммуногенной активности ПАК в качестве адъюванта на свиньях. Также не изучалась иммуногенность вакцин с сополимерами ПАК на сельскохозяйственных животных. Во многих исследованиях было отмечено, что противоящурные вакцины, особенно эмульсионные, требуют новых методов очистки, концентрирования, инактивации вируса ящура и подбора адъювантов. Стремление создать высоко очищенные антигены приводит к необходимости использовать различные методы очистки как химические, так и физические. Перечисленные вопросы, которые требуют своего разрешения, стали основой наших исследований. Цель и задачи исследования. Главной целью наших исследований был поиск новых адъювантов из группы синтетических полиэлектролитов, использование их при производстве противоящурных вакцин и изучение свойств вакцин с этими адъювантами в лабораторных условиях на крупном рогатом скоте и свиньях. Научная новизна. Практическое значение работы. На основании проведенных исследований разработаны, одобрены ученым советом и утверждены
директором ФГУ Федеральный центр охраны защиты животных Методические рекомендации по получению высокоочищенных концентратов вируссодержащего материала для изготовления противояхцурных вакцин и диагностикумов г.