Оценка эффективности различных методов диагностики инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота

• Автор: Двоеглазов, Николай Геннадьевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 126 с. : ил.

1. Обзор литературы

1.1. Структурная, морфологическая, генотипическая и иммунологическая

характеристика ВЛКРС.

1.2. Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

1.2.1. Серологические методы диагностики

1.2.1.1. Реакция иммунодиффузии в геле агара

1.2.1.2. Иммуиоферментный анализ, как альтернатива РИД

1.2.1.3. Иммуноблотииг

1.2.1.4. Причины выпадения серологических реакций.

1.2.2. Молекулярные методы диагностики

1.2.2.1. Полимеразная цепная реакция

1.2.2.2. Способы оптимизации и особенности проведения ГИДР
Заключение по обзору литературы.
2. Собственные исследования.
2.1. Материалы и методы исследований
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Сопоставление результатов диагностических исследований крупного рогатого скота на инфекцию вируса лейкоза в РИД и ИФА.
2.2.2. Сравнительное изучение эффективности тестсистем на основе ПЦР.
2.2.3. Роль и место ИФА и ПДР в системе общепринятых методов диагностики инфекции ВЛКРС и оптимизации схемы оздоровительно профилактических мероприятий
3. Обсуждение результатов собственных исследований
4. Выводы.
5. Практические предложения.
Список литературы


Оптимизированный регламент применения РИД, ИФА и ПЦР в системе оздоровительнопрофилактических мероприятий при ВЛКРСинфекции. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии гг. Иркутской НИВС Иркутск, международной научнопрактической конференции Современные проблемы эпизоотологии Новосибирск, международной научнопрактической конференции Актуальные вопросы ветеринарной медицины Новосибирск, Сибирской Межрегиональной научнопрактической конференции Новосибирск, . Публикации. По теме диссертации опубликованы 8 научных работ, в том числе одна в журнале Сибирский вестник сельскохозяйственной науки, рекомендованном ВАК РФ. Структура н объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 5 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследовании, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована таблицами и 4 рисунками. Список использованной литературы включает 5 источников. Этиологическим агентом бычьего лейкоза является вирус, получивший название вирус лейкоза крупного рогатого скота ВЛКРС, или vi i vi V. Эго экзогенный онковирус, относящийся к семейству vii, подсемейству vii, роду vi. Вместе с вирусом Тклеточного лейкоза человека V, ВЖРС относится к особой группе, обозначенной типом Е Л. Г. Бурба и Кунаков, В. А. Сергеев и Б. Г. Орлянкин, П. Н. Смирнов и соавт. В.Н. Сюрин и соавт. В.Ю. Луговцев и Д. А. Васильев, i . После связывания со специфическими рецепторами клеточной мембраны ВЛКРС проникает внутрь путем эндоцитоза. Затем с помощью обратной транскриптазы на геномной РНК синтезируется ДНК вируса, которая интегрирует в ДНК клетки, образуя провирус. ВЛКРС не имеет предпочтительных сайтов интеграции в хромосомах. Инфицированные клетки содержат от одной до четырех копий провируса. Последний но многим характеристикам ведет себя как нормальный ген клетки, который передается ее потомству. Интеграция является необходимым условием для репликации вируса. Для обеспечения репликации ВЛКРС необходимо всего три гена , и v. Из интегрированного провируса транскрибируются копии вирусной РНК и мРНК последние транслируются в белки. При достаточном количестве геномных РНК и необходимых вирусных белков образуются вирусные частицы вирионы, которые затем освобождаются из клетки путем почкования, и жизненный цикл ретровируса замыкается Г. Н. Смирнов и соавт. Е.В. Гусева и Т. А. Сатина, Б. Г. Орлянкин
и соавт. В.Ю. Луговцев и Д. А. Васильев, . Структура и геном ВЛКРС Впервые морфологию ВЛКРС достоверно описал в году i в ультратонких срезах лимфоцитов больной лейкозом коровы, стимулированных фитогемагглютинином, при краткосрочном их культивировании. Электронномикроскопическими исследованиями краткосрочных культур лимфоцитов от ВЛКРСинфицированного крупного рогатого скота, а также персистентно инфицированных клеточных культур было установлено, что вирусные частицы имеют сферическую форму. Внешняя вирусная оболочка представлена 2контурной мембраной, которая лабильна, изза чего диаметр вирионов может сильно варьировать от до 0 им. На ее поверхности расположены шипики пепломеры с пуговкообразным утолщением на конце, длиной 1 нм, которые состоят из субъединиц, образованных двумя гликозилированньтми вирусными белками и , отвечающими за типоспецифичность. Зрелые вирионы ВЛКРС содержат центральнорасположенный электронноплотный нуклеоид, диаметр которого варьирует от до нм. Центральная часть нуклеоида отделена от внешней вирусной оболочки промежуточным слоем Л. Г. Бурба и Кунаков, В. А. Сергеев и Б. Г. Орлянкин, В. Н. Сюрин и соавт. Б.Г. Орлянкин и соавт. В.Ю. Луговцев и Д. А. Васильев, . Гексагональное очертание нуклеоида в ультратонких срезах позволяет предполагать икосаэдрическую симметрию. Две одноцепочные 0 плюсРНК, соединенные водородными связями в области 5концов, связаны с внутренними структурными протеинами р и р, и совместно с р и р образуют ядро В. А. Сергеев и Б. Г. Орлянкин, Е. В. Гусева и Г. О. Iviiv, .