Лептоспироз в Республике Мали и идентификация лептоспир

• Автор: Кулибали, Д.
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1994
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения .

1.2. Распространенность лептоспироза в

странах Африки.

1.3. Климатогеографические и экономические особенности Республики Мали.

1.4. Дифференциация лептоспир.

1.5. Молекулярные аспекты организации

лептоспир

5 1.6. Использование некоторых современных методов

анализа для ускоренной идентификации инфекционных агентов, в том числе лептоспир
ГЛАВА П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы исследования
2.1.1. Культивирование лептоспир
2.1.2. Серологические исследования
2.1.3. Выделение ДНК
2.1.4. Подбор праймеров и постановка
амплификации
2.1.5. Спектрофотометрическая оценка концентрации и чистоты ДНК и праймеров
2.1.6. Электрофорез в агарозном геле .
2.1.7. Идентификация лептоспир

ГЛАВА i. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Характеристика роста исследуемых штаммов
лептоспир .
3.3. Распространенность лептоспироза в Рес
публике Мали
3.3. Этиологическая структура лептоспироза крупного рогатого скота в Республике
Мали
3.4. Подбор праймеров для использования полимеразной цепной реакции
3.5. Первичные испытания праймеров и подбор условий для постановки полимеразной цепной реакции .
3.6. Проверка специфичности праймеров и оценка чувствительности метода на препаратах ДНК . i и других микроорганизмов .
3.7. Отработка метода постановки полимеразной цепной реакции на препаратах бактериальной массы Ь. i .
3.8. Оценка работы метода в модельной системе
при исследовании образцов бакмассы
. i, разведенных в моче .
ГЛАВА У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ III
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА


Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, практические рекомендации, выводы, список использованной литературы. ГЛАВА I. I.I. Лептоспироз представляет собой зооантропонозную природноочаговую инфекцию домашних, промысловых, многих видов диких животных и человека. Значительный вклад в дело изучения лептоспироза и разработку мер борьбы внесли советские ученые Газарян, С. В.В. Ананьин, В. И.Терских, С. Я.Любашенко, В. С.Киктенко, Ю. А.Малахов, Ю. Г.Чернуха, Р. Ф.Сосов и др. Возбудителем болезни являются лептоспиры. В г. Международный Подкомитет по таксономии лептоспир и спирохет выделил лептоспиры в самостоятельное семейство i , в порядке ii В него включен род i , объединяющий два вида ь. Ввд патогенных лептоспир включает 2 серовара, которые по степени антигенного родства объединены в серологические группы. Вид сапрофитные лептоспиры содержит серовара и серологические группы. Морфологически,, виды не отличаются друг от друга. Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красителями, и в процессе окрашивания их морфология изменяется. Лептоспиры изучают, преимущественно, в темном поле зрения микроскопа в раздавленной и висячей капле. Лептоспиры представляют собой грамотрицательные микроорганизмы с мелкими первичными завитками, плотно прилега друг к другу и напоминают плотную пружину с загнутыми и утолщенными концами. Они имеют вторичные завитки на концах, придающие им или Собразную форму. Существуют также и бескрючковые штаммы лептоспир. Длина лептоспир 4 мкм иногда мкм, диаметр 0,0, мкм 0,0,3 мкм В. Г.Романенко, Газарян, А. А.Варфоломеева, В. И.Терских, Киктенко, С. Я.Любашенко, Ю. А.Малахов, . В старых культурах лептоспиры преобладают более длинной формы В. С.Газарян, В. В.Ананьин, . При электронномикроскопическом исследовании структуры лептоспир установлено, что они состоят из осевой нити, цитоплазматического цилиндра, равномерно закрученного вокруг ригидной осевой нити, поперечных колец и многослойной оболочки. Лоалагают, что осевая нить состоит из двух отрезков, сближающихся в центральной части лептоспиры. На поверхности цитоплазматического цилиндра при специальной обработке обнаруживают микрофибриллы, цитоплазма мелкогранулярная, в старых культурах видны вакуоли . X.ivi, I. Нуклеотид расположен эксцентрично, содержит тонкие беспорядочно расположенные фибриллы ДНК. Лептоспиры не имеют жгутиков, но обладают активной подвижностью. Постоянное движение является их характерной особенностью. Обычными формами движения в жидких средах являются вращательное, прямолинейное поступательное с одновременным вращением вокруг собственной оси. При культивировании на полужидких и плотных агаровых средах лептоспиры при движении как бы пробуравливают
толщу среды, совершая то более быстрые, то медленные змеевидные или волнообразные движения. Потеря подвижности указывает на гибель лептоспир М. В.Земсков, С. Я.Любашенко, М. А.ЭДусаев, Г. Л.Соболева, В. С.Соловьева, . Однако, во всех случаях потерю подвижности нельзя отождествлять с гибелью микробной клетки. При воздействии неблагоприятных факторов антибиотиков, дезинфектантов и др. В организме животных лептоспиры в основном локализуются в крови и в извитых канальцах почек и выделяются с мочой, инфицируя воду, корм, пастбища, почву Источником инфекции являются больные и переболевшие животные лептоспироносители. Сельскохозяйственные животные заражаются при выпасе на инфицированных лептоспирами пастбищах, при водопое из зараженных водоемов, а также через корм, подстилку, при поедании трупов зараженных грызунов и продуктов убоя животных. Лвди заражаются в большинстве случаев при купании в инфицированных лептоспирами водоемах И. В.Мистюк, М. В.Годлевская, Д. И.Дранкин, Е. П.Бернасовская, , при использовании воды для хозяйственных и бытовых нужд М. Х.Агузарова, В. В.Мефодьев, , во время работ в заболоченных, сырых местах, рыбной ловле, на охоте, при уходе за животными, при убое животных, разделке туш и обработке животного сырья З. А.Гольдштейн, , , З. М.Бялик, Е. Н.Горшанова, А. А.Дубова, , при употреблении сырого молока от больных животных М.