Иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза пушных зверей : Лисица, норка и писец

• Автор: Моисеев, Александр Викторович
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Щелково
• Количество страниц: 151 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИИ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика возбудителя хламидиоза

1.2. Устойчивость к физикохимическим факторам и антимикробным веществам

1.2.1. Химический состав

1.2.2. Антигенная структура

1.3. Репродукция хламидмй в культурах клеток, на куриных эмбрионах и

лабораторных животных

1.3.1. Индикация и идентификация антигенов

хламидий в патологическом материале

1.3.2. Серологические реакции
1.4. Тестсистема ИФА при диагностике
инфекционных болезней животных
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Изоляты хламидий
2.1.2. Сыворотки и патологический материал
2.1.3. Подопытные животные и куриные эмбрионы
2.1.4. Выделение и идентификация возбудителей
2.1.5. Изучение биологических свойств изолированных микроорганизмов
2.1.5.1. Патогенность
2.1.5.2. Антигенные свойства
2.1.6. Серологические свойства
2.1.7. Статистическая обработка результатов исследований
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Выделение возбудителей хламидиоза от клеточных
и домашних плотоядных на куриных эмбрионах
2.2.2. Биологические свойства изолятов хламидий
2.2.2.1. Изучение морфологии хламидий
2.2.2.2. Патогенность изучаемых изолятов хламидий
для куриных эмбрионов и лабораторных животных
2.2.2.3. Антигенные свойства возбудителей хламидийных инфекций пушных зверей лисица, норка и песец
и крупного рогатого скота
2.2.3. Разработка иммуноферментной тестсистемы для
диагностики хламидиоза пушных зверей
2.2.3.1. Проведение исследований по получению мажорного
белка наружной мембраны хламидий
2.2.4. Получение иммунных антнхламидннных, специфических антител и антиО пушных зверей
лисица, норка и песец
2.2.4.1. Изучение динамики уровня хламидийных антител в
сыворотках крови пушных зверей, иммунизированных вакциной при получении сывороток
2.2.5. Выделение иммуноглобулинов класса в из сыворотки
лисиц, норок и песцов
2.2.6.Получение антиС лисиц, норок и песцов из гипериммунной сыворотки
2.2.7. Выделение антивидовых иммуноглобулинов антиО лисиц, норок и песцов
2.2.8. Мочение антивидовых иммуноглобулинов антиС лисиц, норок
и песцов ферментом пероксидазой
2.2.9. Тсстсистема иммуноферментного аназиза для диагностики хламидиозов пушных зверей
2.2.9.1. Оптимизация условий проведения иммуноферментного
анализа
2.2Диагностика хламидиоза пушных зверей методом
Иммуноферментного анализа
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. ПРИЛОЖЕНИЯ 9
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Хламидии являются грамотрицатсльными, сфероидальными неподвижными, облигатными высокоспециализировамными внутриклеточными паразитами, которые чувствительны к ограниченному количеству антибиотиков 5, 1. Впервые морфологию возбудителя и его цикл развития описали и 6, изучая хламидии при помощи светового микроскопа. Позже для исследования стали применять микрокиносъемку и электронный микроскоп . Авторы отмечают, что при размножении хламидии проходят стадии элементарных телец высокоинфекционной формы возбудителя, адаптированной к внеклеточному существованию ретикулярных инициальных телец формы внутриклеточного существования паразита,
высоколабильной вне клеток хозяина, метаболически активной, обеспечивающей репродукцию микроорганизма 9, 4,9. Для всех хламидий характерен уникальный и своеобразный цикл развития. Зрелой морфологической структурой хламидий, обладающей инфекционностью, являются элементарные тельца, адаптированные к внеклеточному существованию , , 2. Элементарное тельце, обладающее инфекционностью, но ограниченной биохимической активностью, содержит в цитоплазме хламидиоплазме рибосомы и нуклеоид. Генетический аппарат элементарного тельца представлен одной гигантской эксцентрично расположенной молекулой ДНК, упакованной в нуклеоид. РНК содержится в рибосомах. Другая форма хламидий ретикулярное тельце неинфекционная форма внутриклеточного существования паразита, очень лабильная вне клеток хозяина, метаболически активная, обеспечивающая репродукцию микроорганизма , 5, 4, 0. Элементарное и ретикулярное тельца снаружи ограничены двумя трехслойными мембранами морфологические аналоги клеточной стенки и цитоплазматической мембраны грамотрицательиых бактерий 3, 0. Ретикулярные тельца, в отличие от элементарных, имеют микрокапсулу на поверхности клеточной стенки. У элементарных телец клеточная стенка и находящийся под ней промежуточный слой являются аналогом пептндогликанового слоя грамотринательных бактерий. Клеточная стенка ответственна за ригидность телец, сохранение формы сферы внутри и вне клеток хозяина , 6. Элементарные и ретикулярные тельца имеют сферическую форму диаметром соответственно и 0 нм. Снаружи они ограничены двумя трехслойными мембранами толщина каждой равна 8 нм. Клеточная стенка ответственна за ригидность телец, сохранение формы сферы внутри и вне клеток хозяина 6, 1, 1. В центре элементарных телец находится плотный непрозрачный нуклеоид и менее плотная структура по периферии. Нуклеоид располагается эксцентрично остальная часть телец состоит из
плотного вещества, в котором содержатся рибосомы. Генетический аппарат элементарного тельца представлен одной гигантской молекулой ДНК. РНК содержится в рибосомах 2. Элементарные тельца окрашиваются в красный цвет по Стемпу и Маккнавслло, в фиолетовокрасный по РомановекомуГимзе и синий по Костанедо. При окраске по Граму они отрицательны. Ретикулярные тельца отличаются полиморфизмом, не имеют оформленного нуклсоида. Внутри их имеются сложная система мембран, которая составляет единое целое с внешними мембранами, представляющая завитки сетчатой структуры, авторы считают их лизосомами 3. По Романовскому1имзе и Маккиавелло ретикулярные тельца окрашиваются соответственно в синий и голубой цвет, что говорит об их выраженной базофилыюсти. Элементарные тельца штамма ТЧЧАК, вызывающего пневмонию у человека, характеризуются полиморфноетыо. Основными лапами цикла развития микрооранизма являются проникновение элементарного тельца в цитоплазму преобразование элементарного тельца в вегетативную форму неинфекционное ретикулярное тельце, с хрупкой клеточной стенкой и аморфным расположением ядерного материала деление ретикулярных телец с последовательным уменьшением их размера и образованием переходных форм промежуточные тельца преобразование последних в элементарные тельца нового поколения микроорганизма и выход последних из клетки , 5, 4,8. Хя а мидии стимулируют фагоцитоз, обусловливающий проникновение элементарных телец внутрь клетки путем активизирования ранее неактивных фагоцитов 4. При фагоцитозе выделяют две стадии. Перваяадсорбиия возбудителя на поверхности клетки хозяина за счет рецепторов клеточной поверхности, вторая эндоцнтоз.