Кариотипическая стабильность и морфологические показатели перевиваемых линий клеток, культивируемых в среде с ликвором

• Автор: Макаров, Александр Васильевич
• Шифр специальности: 16.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 165 с. : ил.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Перевиваемые линии клеток в биотехнологии

2.2 Проблемы стабильности биологических свойств

перевиваемых линий клеток

2.2.1. Роль отдельных факторов систем культивирования в

дестабилизации кариологических и биотехнологических показателей клеточных культур

2.2.2. Стандартизация систем культивирования клеток и методы

контроля стабильности перевиваемых линий клеток

2.3. Цереброспинальная жидкость крупного рогатого скота как

биологически активное средство

2.3.1 Краткие сведения о цереброспинальной жидкости
2.3.2 Цереброспинальная жидкость как биологически активное
средство
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 5
3.1.1. Культуры клеток 5
3.1.2. Питательные среды, сыворотка крови, ликвор, растворы
3.1.3. Реактивы и оборудование
3.1.4. Животные
3.1.5. Вирусы
3.1.6. Методы культивирования клеток
3.1.7. Методы цитоморфологичсского и кариологического
исследования клеточных культур
3.1.8. Бактериологические методы
3.1.9. Вирусологические методы
3.1 Статистические методы
3.2.1.
3.2.1.1.
3.2.1.2.
3.2.1.2.1.
3.2.1.2.2. 3.2.1.3.
3.2.1.3.1.
3.2.1.3.2.
3.2.1.3.3.
3.2.2. 3.2.2.1.
3.2.2. 2.
3.2.2.3.
3.2.2.4.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследование вирусологических, токсических и ростостимулиругощих свойств цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота
Оптимизация стерилизующей фильтрации и хранение ликвора
Вирусологическое исследование ликвора
Контроль ликвора на контаминацию вирусом диареи крупного рогатого скота
Исследование цереброспинальной жидкости на наличие антител к вирусу ВУО
Изучение токсичности и ростостимулирующих свойств ликвора в культуре клеток
Определение индекса цитотоксичности цереброспинальной жидкости для клеток перевиваемых линий ПО и Г1С Изучение влияния цереброспинальной жидкости КРС на адгезивные свойства ПЛК
Определение эффективности клонообразования клетками линий ПО, ПС, МОВК и УЕ1Ю в питательной среде с ликвором
Оценка биологических характеристик перевиваемых линий клеток
Оценка сублинии перевиваемых клеток почки овцы ПОВНИИВВиМ
Оценка сублинии перевиваемых клеток почки сайги ПСВНИИВВиМ
Оценка перевиваемой линии клеток почки теленка МОВК
Оценка перевиваемой линии клеток почки африканской зеленой мартышки УЕЯО
Изучение цитоморфологических, кариологических и
биотехнологических показателей культур клеток, культивируемых в среде с цереброспинальной жидкостью
3.2.3.1. Ростовые свойства клеток в среде с цереброспинальной
жидкостью
3.2.3.2. Цитоморфологические характеристики клеток в среде с
ликвором
3.2.3.3. Определение уровня патологических митозов клеток в среде
с ликвором
3.2.3.4. Кариологический анализ клеток, длительно культивируемых
в среде с ликвором
3.2.3.5. Вирусрепродуцирующие свойства культур клеток в среде с
ликвором
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Герхарта по получению недифференцированных плюрипотентных линий стволовых клеток из эмбриобласта внутренней клеточной массы бластоцисты мыши и изолированию бессмертных линий эмбриональных стволовых клеток человека. В случае созревания ЭСК в специализированную клеточную линию, прогениторные и бластные популяции клеток выполняют роль переносчиков информации на языке мРНК в терминально специализированные клетки. Наиболее значительные достижения клеточной биотехнологии, прежде всего, связаны с внедрением в производство новых профилактических препаратов против вирусных заболеваний человека и животных в качестве клеточных субстратов перевиваемых линий клеток Гаврилов, Бектемиров, Миронова, Кудинова, Попова, Кармышева, Миронова, Преображенская, Козлов, Бектемиров, Горбунов, i, , iii, . VII, . В году Всемирная организация здравоохранения признала возможным использование в биотехнологии перевиваемых клеток Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов, , и определила требования к ним Уиблин, . Позднее в Российской Федерации также были разработаны требования к аттестации перевиваемых линий клеток субстратов производства и контроля медицинских иммунобиологических препаратов Мигунов, Лобань, . В.П. Количество ПЛК, используемых в биотехнологии, увеличивается как за счет выделения новых линий, так и обнаружения новых свойств у ранее по
лученных линий клеток. Коллекции клеточных культур постоянно пополняются новыми клеточными линиями из тканей и органов сельскохозяйственных Пол Дж, Феннер, МакОслен, Мимс, Сэмбрук, Уайт, Герасимов, Герасимова, Худяков, Иванющенкова, Федорова, Герасимов, Герасимов, Бурдов, Дьяконов, Прохоров, , домашних и диких Зуев, Юрков, Курносов, животных, а также изучается их чувствительность к вирусам различных таксономических групп. Первой перевиваемой линией клеток, широко применяемой в ветеринарной вирусологии в качестве субстрата для репродукции вирусов, стала ПЛК почек новорожденных сирийских хомячков ВНК, высокочувствительная к таким возбудителям, как вирусы ящура Мищенко, , бсшенст1 ва Царева, Исаенко, Урманова, Юрченко и др. Жестсрев, Юрков, . Эту же линию используют в Китае в медицинской вирусологии для крупномасштабного изготовления инактивированной вакцины, против японского энцефалита , . В США с использованием культуры клеток ВНК разработали вакцину против катаральной лихорадки овец i, i, . Другой наиболее известной перевиваемой культурой клеток является линия клеток почки африканской зеленой мартышки V, установленная в Японии в году для исследования вируса V , , Vivi, i, , изученная по биологическим свойствам и паспортизированная в США АТСС. Франции , . I, , x, , , , , , i, . В России данная культура нашла применение в виде сублинии этих клеток V В, полученной Р. Я. Подчерняевой и соавторами в институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РЛМН . Эта сублиния клеток изучена и аттестована в соответствии с требованиями ВОЗ Поздняков, Авилов, Гололобова, Дьяконов и др. В клетках культуры V В активно репродуцируется вирус бешенства Шсвак, и получена культуральная антирабическая вакцина Шевченко, Курносов, Юрков и др. Исследованиями показано, что вариант вакцинного штамма вируса бешенства Внуково накапливался в клетках сублинии до титров 7,,5 ЛД мл Куликова, Гальнбек, Дьяконов, Симонова и др. Изучение чувствительности линии клеток V В к вирусам выявило ее пермиссивность к арбовирусам, цитомегаловирусу, вирусу гепатита А, вирусу осповакцины. Эта линия клеток была применена для приготовления убитой противогерпетической вакцины ВПГ1 и ВПГ2 Баринский, Лазаренко, Подчерняева, Хижнякова и др. В научных исследованиях ВНИИВВиМ широкое использование получила перевиваемая линия клеток, полученная из почки африканской зеленой мартышки V1. Сублиния этих клеток, поступившая в институт ВНИИВВиМ из Португалии, поддерживала репродукцию вирусов ЭГБО Лурия, , Акабане, Ибараки Балашова, Вишняков, Чурбанова, Витина, Балашова, , катаральной лихорадки овец Новохатский, Суховский, Забежинский, .