Комплексы физиологически активных веществ с ионами меди активных центров церулоплазмина

• Автор: Волков, Александр Александрович
• Шифр специальности: 15.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Свойства церулоплазмина

1.1.1. Фармакологические свойства церулоплазмина.

1.1.2. Структура молекулы церулоплазмина

и его основные биохимические свойства.

1.1.3. Физиологическая роль церулоплазмина

в организме.

1.1.4. Регуляция обмена хмеди в организме

1.1.5. Антиоксидантиые свойства церулоплазмина

1.2. Способы выделения церулоплазмина.
1.3. Термодинамические и кинетические особенности взаимодействия белковых макромолекул
с лигандами
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
2.1. Получение и свойства церулоплазмина
2.1.1. Количественное определение белка в препарате Церулоплазмин
2.1.2. Определение степени очистки.
2.1.3. Электрофорез на плнках из ацетата целлюлозы
2.1.4. Иммуноэлектрофорез по методу СгаЬаг ОгаЬагМШатБ,
2.1.5. Гельпроникающая хроматография низкого давления
2.1.6. Определение ферментативной активности
2.1.7. Количественное определение содержания ЦП
2.2. Физиологически активные вещества
2.2.1. Доксорубицин.
2.2.2. Дигидрокверцетин.
2.2.3. Лецитин
2.3. Очистка растворителей.
2.4. Спектрофотометрические измерения
2.5. Исследования методом ЭПР
2.6. Измерения растворов
2.7. Измерение поверхностного натяжения
2.8. Исследования на модельных системах
2.8.1. Модифицированная поверхность полипиромеллитимида.
2.8.2. Изучение адсорбции.
2.8.3. Модельные системы на основе монослоев Ленгмюра
2.8.4. Получение дисперсии везикул
2.9. Измерение краевого угла смачивания
2 Атомносиловая микроскопия.
ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
3.1. Комплексообразование ДР с ионами меди каталитического центра ЦП.
3.1.1. Характеристика реакционной смеси ДР и
ЦП в воде
3.1.2. Изучение свойств комплексов Си2ДР
на моделях биомембран
3.2. Ассоциация полифенольного флавоноида ДКВ с ЦГ
3.2.1. Обоснование выбора дигидрокверцетина
как протекторного лиганда
3.2.2. Исследование комплексообразования ДКВ с ионами меди II каталитического центра ЦП
3.2.3. Кинетические особенности взаимодействия
ДКВ и Си ЦП.
3.2.4. Комплексное воздействие физиологичеки активных веществ на ЦП
3.3. Защита активных центров ЦП при химиотерапии
ДР комплексами лецитинВМС.
3.3.1. Исследование свойств тонких пленок смеси лецитина и ВМС
3.3.2. Адсорбция ДР на поверхности тонкой пленки сополимера СтЫВПД
3.3.3. Адсорбция ДР на поверхности модифицированных полиамидокислот.
Выводы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ДР и ДКВ с ионами меди использованы в учебном процессе НГМА в дисциплине фармацевтическая химия. Апробация работы. Казань, г, на VII сессии молодых ученых Н. Молодежная научная школа Химия и медицина Уфа, г, Ii i . Новгород, г. По результатам исследований опубликовано 4 статьи и 6 тезисов научных конференций. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, трех глав, выводов и списка цитируемой литературы. Первая глава работы содержит обзор литературы по свойствам медьсодержащего фермента ЦП и методам изучения свойств коллоидных ферментных систем. В третьей главе диссертации представлены и обсуждены результаты исследования комплексов доксорубицина с ионами меди солей и с церулоплазмином, церулоплазмина с дигидрокверцетином, представлены расчеты термодинамической константы устойчивости Кр и ассоциации Ка образующихся комплексных соединений, на примере дигидрокверцетина рассмотрены кинетические особенности его комплексообразования с голубыми ионами каталитического центра церулоплазмина, рассмотрены данные по адсорбции доксорубицина на сополимерах, выступающих в качестве компонентов липосом. Работа изложена на 5 страницах, включая рисунков, 7 таблиц и 4 ссылки. В руководстве диссертационной работой принимала участие доктор фармацевтических наук Кононова Светлана Владимировна. ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Свойства церулоплазмина. Фармакологические свойства церулоплазмина. Церулоплазмин ЦП был получен из плазмы крови и описан в г. СВ. Было установлено, что этот медьсодержащий фермент выполняет ферроксидазную функцию в плазме, окисляя двухвалентное железо до трехвалентного, способствуя его встраиванию в трансферрин i . В г. Два года спустя была выделена и охарактеризована ДНК ЦП i . Исследования и др. ЦП необходим для нормального кроветворения. У животных, находящихся на медьдефйцитной диете, развивалась анемия, явившаяся прямым следствием нарушения продукции ЦП. Убедительные экспериментальные доказательства участия ЦП в метаболизме железа стали стимулом для создания лекарственного препарата на его основе. ЦП начали использовать в качестве антианемического средства. ЦП при апластической анемии. Применение ЦП позволило отказаться от переливаний крови или значительно снизить их количество, повышалась пролиферация клеток костного мозга и ускорялось созревание эритроцитов и лейкоцитов. ЦП был внесен сотрудниками Киевского НИИ онкологии им. Кавецкого, под руководством которых и был создан коммерческий препарат Церулоплазмин человека лиофилизированный. На основе экспериментальных данных были разработаны схемы применения и режим дозировки препарата. До настоящего времени ЦП используют для лечения анемий различного генеза и в комплексной терапии онкологических заболеваний. С х годов внимание исследователей привлекли реакции свободнорадикального окисления, лежащие в основе многих физиологических и патологических процессов в организме. Было установлено, что ЦП является основным антиоксидантом плазмы. Это позволило значительно расширить спектр клинического применения препарата. Выпуск Церулоплазмина освоило Уфимское государственное предприятие по производству бакпрепаратов. ЦП начали применять в лечении заболеваний, для которых одним из основных патогенетических факторов является перекисное окисление липидов ишемической болезни сердца, критических состояний различного генеза. В последнее десятилетие XX века интерес к ЦП резко возрос благодаря важным открытиям, сделанным независимыми группами исследователей. Вопервых, были накоплены и обобщены данные о наследственном заболевании, сопровождающемся нарушением синтеза ЦП ацерулоплазминемии i . Анализ этих данных заставил поновому взглянуть на физиологическое значение ЦП. Результаты экспериментов и клинические наблюдения свидетельствуют о том, что этот фермент нужен не только для окисления железа, ускорения его связывания трансферрином и подавления свободнорадикального окисления. Его более значимой функцией является регуляция содержания железа в тканях организма. Вовторых, было установлено, что ЦП подавляет активность миелопероксидазы нейтрофилов М.