Разработка методик анализа и стандартизации нового биологически активного вещества триазопирим, обладающего противовирусным действием

• Автор: Бережной, Андрей Витальевич
• Шифр специальности: 15.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Пятигорск
• Количество страниц: 0 с. : 183 ил.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ТРИАЗОПИРИМ АКТУАЛЬНОСТЬ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ. СВОЙСТВА, ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА

1.1. СОВРЕМЕННАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ДОСТОИНСТВА И НЕДОСТАТКИ

1.2. ПОЛУЧЕНИЕ. СВОЙСТВА И ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ТРИАЗОПИРИМА

1.2.1. Противовирусная активность и токсичность триазопирима

1.2.2. Синтез и строение триазопирима.

1.2.3. Свойства азолодигидропиримидиновых веществ с узловым атомом азота

1.3. МЕТОДЫ АНАЛИЗА ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИМИДИНА, АЗОЛОАЗИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ И ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ НИТГОАРЕНОВ.
1.3.1. Химические методы идентификации производных пиримидина, азолоазиновых веществ и гетероциклических

нитроаренов.

1.3.2. Химические методы количественного анализа производных пиримидина, азолоазиновых веществ и гетероциклических нитроаренов.
1.3.3. Физикохимические методы анализа производных пиримидина, азолоазиновых веществ и гетероциклических нитроаренов.
1.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИМИДИНА. АЗОЛОАЗИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ И ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ НИТРОАРЕНОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ.
1.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОРГАНИЧЕСКИХ ПРИМЕСЕЙ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВАХ.
1.6. СТАТИСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПТИМИЗАЦИИ АНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК
1.7. ВАЛИДАЦИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК.
Выводы по обзору литературы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ТРИАЗОПИРИМА
2.1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ТРИАЗОПИРИМА ФИЗИКОХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ.
2.1.1. Изучение триазопирима методом УФ спектрофотометрии
2.1.2. ИК спектроскопическое изучение триазопирима.
2.1 3. Установление основных термических характеристик субстанции триазопирима.
2.2.ИДЕНТИФИКАЦИЯ ТРИАЗОПИРИМА ХИМИЧЕСКИМИ
МЕТОДАМИ.
2.2.1. Исследование реакций диазотирования и азосочетания триазопирима после гидрирования нитрогруппы
2.2.2. Изучение взаимодействия триазопирима с ионами тяжелых
металлов.
Выводы по главе 2
ГЛАВА 3. ИСПЫТАНИЯ СУБСТАНЦИИ ТРИАЗОПИРИМА НА
ЧИСТОТУ
3.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНОГО ОРГАНИЧЕСКОГО РАСТВОРИТЕЛЯ
3.1.1. Выявление оптимальных условий ГЖХ определения кислоты уксусной в субстанции триазопирима.
3.1.2. Оценка пригодности для анализа методики определения остаточного количества кислоты уксусной
3.1.3. Установление норматива количественного содержания кислоты уксусной в субстанции триазопирима.
3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕЛЕТУЧИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ПРИМЕСЕЙ В СУБСТАНЦИИ ТРИАЗОПИРИМА.
3.2.1. Установление оптимальных условий ВЭЖХ определения нелетучих органических примесей
3.2.1.1. Изучение спектральных свойств полупродуктов синтеза триазопирима как потенциальных примесных веществ
3.2.1.2. Статистическая оптимизация условий определения нелетучих органических примесей.
3.2.1.3. Идентификация нелетучих органических примесей
3.2.2. Оценка пригодности для анализа методики определения нелетучих органических примесей, установление норматива их
количественного содержания.
Выводы по главе 3.
ГЛАВА 4. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ТРИАЗОПИРИМА. УСТАНОВЛЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ И СРОКА ГОДНОСТИ ИССЛЕДУЕМОЙ СУБСТАНЦИИ.
4.1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИАЗОПИРИМА В СУБСТАНЦИИ.
4.1.1. Выбор оптимальных условий количественного определения триазопирима титриметрическим методом.
4.1.1.1. Изучение кислотноосновных свойств триазопирима в водной
среде
4.1.1.1 Построение кривой ацидиметрического титрования триазопирима в протогенной неводной среде.
4.2.1. Выявление пригодности для анализа методики количественного определения триазопирима методом неводного титрования.
4.2.3. Установление норматива количественного содержания триазопирима в субстанции.
4.2. НОРМЫ КАЧЕСТВА, СТАБИЛЬНОСТЬ И СРОКИ ГОДНОСТИ СУБСТАНЦИИ ТРИАЗОПИРИМА
Выводы по главе 4.
ГЛАВА 5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИАЗОПИРИМА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ
5.1. УСТАНОВЛЕНИЕ ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИАЗОПИРИМА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ МЕТОДОМ ВЭЖХ.
5.1.1. Оптимизация процесса жидкостной экстракции триазопирима.
5.1.2. Изолирование триазопирима из биологических жидкостей, выбор условий ВЭЖХ определения исследуемого вещества в извлечении.
5.2. ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИАЗОПИРИМА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ
5.3. ПРИМЕНИМОСТЬ ВЭЖХ МЕТОДИКИ АНАЛИЗА ТРИАЗОПИРИМА В КРОВИ И МОЧЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ МЕТАБОЛИЗМА ИССЛЕДУЕМОГО ВЕЩЕСТВА
Выводы по главе 5.
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Важнейшей группой химиотерапевтических средств, обеспечивающей относительный фармакотерапевтический контроль над основными вирусными заболеваниями, являются аномальные нуклеозиды таблица 1. Пхмг, АТ. V, тимозид. Ы1с1. П, МТ. Однако, нуклеозидная терапия вирусных заболеваний характеризуется рядом недостатков. Вопервых, это сформировавшаяся лекарственная резистентность вируса простого герпеса и ВИЧ, требующая, соответственно, сочетанного применения аномальных нуклеозидов и токсичных тимидинкиназанезависимых средств фоскарнетнатрия, а также двух или поливалентного комбинирования антиретровирусных лекарственных препаратов 9,. Вовторых, это низкая эффективность терапии существующими нуклеозидными средствами ОРВИ и гриппа нозологий, остающихся неуправляемыми и составляющих свыше всей инфекционновирусной заболеваемости за исключением герпесвирусных заболеваний ,. Таким образом, необходимость разработки новых высокоэффективных противовирусных лекарственных средств группы аномальных нуклеозидов очевидна. В течение последних полутора десятилетий на кафедре органической химии ГОУ ВПО УГТУУПИ проводятся исследования по поиску эффективных противовирусных агентов в ряду азолоазиновых соединений с узловым мостиковым атомом азота Русинов В. Л., Чупахин О. Н., Уломский Е. Н., Петров А. Ю. . В ходе изучения азолодигидропиримидинов синтезирован триазопирим натриевая соль 5метп6нитро4,7дигидро1,2,4триазоло1,5апиримидин7она. Результаты биологических исследований, проведенных на базе Института вирусологии имени Д. И. Ивановского, показали перспективность триазопирима, обладающего высокой активностью в отношении широкого спектра вирусных возбудителей таблица 2. Противовирусное действие триазопирима, вероятно, объясняется наличием кислотного центра в дигидропиримидиновом фрагменте молекулы, который подвергается в организме гликозилированию с образованием аномального пиримидинового нуклеозида . Аномальный нуклеозид встраивается в вирусный геном и блокирует синтез специфических белков на этапе транскрипции ДНК, ингибируя действие ферментных систем, обеспечивающих либо считывание вирусной ДНК в инфицированной клетке с вирионной РНК, либо репликацию вирусной ДНК ,. Следовательно, триазопирим, при условии метаболической активации i viv, например, фосфорибозилпирофосфатом, сходен структурно по фармакологически активной пиримидиновой части молекулы и по механизму действия с такими нуклеозидными противовирусными лекарственными средствами, как идоксуридин, зидовудин, ламивудин, ставудин . В результате изучения острой токсичности триазопирима установлено, что при однократном внутрибрюшинном введении крысам составляет 5 мгкг, белым мышам 0 мгкг, на культуре клеток 0 мгкг. Следовательно, триазопирим является умеренно опасным веществом в соответствии с принятой в РФ классификацией и может использоваться в клинической практике. Синтез и строение триазопирима Согласно технологической схемы лабораторного регламента получения триазопирима, разработанной на кафедре органической химии ГОУ ВПО УГТУУПИ Уломским Е. Для получения азолоазинового ядра используется метод циклоконденсации гетероциклического амина 3аминотриазола I с биэлектрофильным соединением этилацетоацетат , . Взаимодействие проводится в среде кислоты уксусной и завершается образованием 5метил7оксо4,7дигидро1,2,4триазоло1,5апиримидина II с выходом . Несмотря на ядефицитность молекулы триазопирима, вызванную присутствием четырех гетероатомов азота , введение нитрогруппы в азиновый фрагмент функционализация осуществляется прямым нитрованием с использованием нитрующей смеси кислота азотная кислота серная ,3. Выход продукта нитрования 5метил6нитро7оксо4,7дигидро1,2,4триазоло1,5апиримидина III составляет . Присутствие сильного электроноакцептора нитрогруппы в пиримидиновом фрагменте азолоазинового ядра соединения III обуславливает высокую подвижность протона у атома азота в положении 4, который легко замещается атомом натрия с образованием соли триазопирим. Выход конечного продукта . Триазопирим представляет собой дигидрат, что является отражением свойства, присущего всем нитроазолопиримидиновым соединениям способности к ковалентной гидратации .