Получение антигенов Brucella melitensis Rev-1 и Brucella abortus 19 BA и оценка перспективности их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины

• Автор: Крыканов, Артем Александрович
• Шифр специальности: 06.02.02, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу в РФ на современном этапе развития животноводства

1.2. Характеристика антигенной структуры бруцелл.

1.3. Особенности иммунного ответа при бруцеллезе.

1.4. Вакцины, применяемые для специфической профилактики бруцеллеза животных

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВА1ЩЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.1. Материалы

2.1.2. Методы исследований.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЖДОВАНИЙ
2.2.1. Получение посевных культур штаммов В. ii v1 и . ВА при культивировании их на плотных и жидких питательных средах.
2.2.2. Культивирование В. ii v1 и .
в биореакторах марки Биор 0,.
2.2.3. Концентрирование нативных культур изучаемых бруцелл методом ультрафильтрации.
2.2.4. Получение субклеточных фракций культуры штамма
В. ii v1
2.2.5. Получение корпускулярных антигенов культур штаммов
.ii v1 и . ВА и приготовление комбинированного корпускулярного антигена бруцелл
2.2.6. Моделирование инфекционного процесса при бруцеллезе
на лабораторных животных
2.2.7. Изучение иммуногенности полученных антигенов
в опытах на лабораторных животных
2.2.8. Результаты изучения иммуногенности комбинированного инактивированного корпускулярного антигена в опытах на овцах
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4. ВЫВОДЫ.
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Другим решением задачи специфической профилактики бруцеллеза представляется создание инактивированных вакцин на основе убитых культур бруцелл. Подобные препараты в настоящее время находят применение в ветеринарной практике. К их числу можно отнести вакцину Н Абролан, которая представляет собой суспензию инактивированных формалином микробных клеток В. 3 находящихся в форме, и полидисперсного адъюванта вакцину Абортос, состоящую из суспензии инактивированных формалином микробных клеток В. форма и полидисперсного адъюванта . В последние годы Шумиловым К. В. и Калмыковым В. В. запатентована Вакцина против бруцеллеза крупногорогатого скота. ., штамм КВ 0 в форме и неполный адъювант Фрейда. По данным авторов, эта вакцина, не индуцирующая образование антител, способна обеспечивать защиту от бруцеллеза морских свинок при заражении их вирулентными культурами В. В настоящее время в РФ проводятся исследования по созданию Сплитвакцины i англ. Сплитвакцины не являются гомогенными, содержат примесь отдельных органических соединений или комплексы, состоящие из белков, полисахаридов и липидов. Поэтому, выбор оптимальной антигенной основы для создания противобруцеллезных вакцин для животных является актуальной задачей для ветеринарии. Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований получить различные антигены культур штаммов ii v и оценить перспективность их использования в качестве основы противобруцеллезной вакцины для мелкого рогатого скота. Получить посевные культуры штаммов В. v1 и В. ВА при культивировании их на плотных и жидких питательных средах. Провести культивирование В. v1 и В. Получить субклеточные фракции культур штамма В. Получить корпускулярные антигены культур штаммов . v и . ВА и приготовить комбинированный корпускулярный антиген изучаемых бруцслл. Смоделировать инфекционный процесс при бруцеллезе на лабораторных животных и разработать метод обострения течения инфекции. Изучить иммуногенность приготовленных антигенов бруцелл в опытах на лабораторных животных. Изучить иммуногенность комбинированного инактивированного корпускулярного антигена в опытах на овцах. Научная новизна. Впервые получен комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на основе культур штаммов В. v1 и . ВА в соотношении 12, обладающий иммуногенными свойствами. Титр антител у иммунизированных морских свинок и овец составил не менее 1. Применение комбинированного инактивированного корпускулярного антигена для специфической профилактики бруцеллеза у овец позволяет предотвратить заражение бруцеллезом . Полученные методом гельхроматографии белковые фракции В. v1 с молекулярной массой 5Г,5 кД, кД и 5 кД обладают слабыми иммуногенными свойствамии являются не перспективными для создания на их основе вакцинных препаратов для специфической профилактики бруцеллеза животных. Терапевтическая эффективность пефлоксацина в условиях смоделированного инфекционного процесса при бруцеллезе составила . Впервые разработан метод глубинного культивирования культур штаммов В. v1 и В. ВА с использованием биореакторов марки Биор0. Выход биомассы при выращивании культуры штамма . v1 был выше в 1,3 раза, чем . ВА. Практическая значимость. На производственном участке ООО Агровет г. Киров0 воспроизведена технология глубинного культивирования культур штаммов В. v1 и . В А с использованием биорсакторов марки Биор0,. Получено по 3 серии культур штаммов бруцелл с высоким выходом бактериальной массы. На базе лицензированной по работе с микроорганизмами IIV групп патогенности лаборатории НИИ микробиологии МО РФ г. Киров успешно проведено моделирование инфекционного процесса при бруцеллезе морских свинок и овец. Разработан метод обострения инфекционного процесса с использованием иммунодепрессанта циклофосфана. Разработанный комбинированный инактивированный корпускулярный антиген на основе культур штаммов В. v1 и .